之后，在培养物中已不再含有任何胚性细胞，这时若想再恢复它们的胚胎发生能力就不可能了。然而，如果在培养物中存在少量胚性细胞，只是由于处在支配地位的非胚性细胞的抑制作用，这些胚性细胞的全能性无法表达，在这种情况下，通过改变培养基成分，使之有选择地促进全能细胞的增殖，就应当有可能恢复该培养物的形态发生潜力。 7、离体培养条件下，茎、芽和根的再生方式有几种？

答:离体条件下植物细胞全能性实现的途径 ? 1、植物体细胞

? 2、植物性细胞 可诱导形成完整的植物体 ? 3、植物原生质体 4、融合的原生质体→可发育成杂种植物

5、转基因的植物细胞→可发育成具有新性状的植物体

8、影响器官发生的主要因素有哪些？

答:1、外源激素的影响2、物理因素：光照、温度3、外植体的生理状态4、培养物的年龄

9、何谓胚状体？胚状体与合子胚有何异同？

答：胚状体 离体培养条件下，没有经过受精过程，但是经过了胚胎发育过程所形成的胚状类似物，此现象无论在体细胞培养还是生殖细胞培养中均可以看到，因而统称为体细胞胚或胚状体。

异同 细胞胚具有两极性，而器官发生是单极的。细胞胚维管组织分布是独立的Y 字形结构，形成的再生植株遗传性比器官发生的稳定。 10、离体培养条件下，胚状体的产生有几种方式？

答：直接从外植体上产生体细胞胚 由愈伤组织产生 悬浮培养中由胚性细胞复合体表面产生 有悬浮培养中游离的单细胞产生 由单倍体细胞产生 11、胚状体的发育大约要经过哪几个时期？ 答：一、诱导期 二、胚胎发育期 12、影响胚状体发生的主要因素有哪些？ 答：因素：氮源 生长素 组织起源

13、如何区分离体培养条件下的不定芽与胚状体？

答：体细胞经过了胚胎发育过程，具有胚根、胚芽和胚轴的完整结构，并与原外植体的微管组织无联系，是个相对独立的个体，区别于组织培养中以器官发生方式分化的不定芽和不定根。

14、目前研制的人工种子结构是怎样的？ 答：人工种子由以下三部分组成：

①具有良好发育的体细胞胚，并能发育成正常完整植株：广义的体细胞胚由组织培养中获得的体细胞胚即胚状体、愈伤组织、原球茎、不定芽、顶芽、腋芽或小鳞茎等繁殖体组成。②人工胚乳，一般由含有供应胚状体养分的胶囊组成，养分包括矿质元素、维生素、碳源及激素等。③胶囊之外的包膜称之为人工种皮，有防止机械损伤及水分干燥等保护作用。

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15、控制胚性细胞同步化的方法有哪些？

答：①抑制剂法促进细胞同步分裂；②低温处理促进细胞同步分裂；③渗透压控制同步化法；④同步胚的分段收集筛选法；⑤通气法。

16、人工种子繁殖体如何处理？人工种子的制备要点有哪些？

答：繁殖体的处理：①体细胞胚形成后，需要在无激素培养基上经过一定阶段的后熟培养，然后进行脱水干燥，再将畸形胚选出后才能进行包埋。在脱水之前用ABA处理体细胞胚强迫其进入休眠，更有利于长期储存。②微型变态器官繁殖体不能过度脱水，但亦需要适当干燥，除去表面多余的水分，同时要进行表面消毒处理以防止包被后的感染。为了延长储存时间，需根据使用季节进行适当的休眠处理。③以微芽为繁殖体时，不能进行脱水处理，但必需筛选生长健壮、组织充实的芽进行包埋。

第十二章课后思考题（仅供参考）

1. 简述动物细胞培养的特点与营养需求

答：针对动物细胞培养的各种方法，相应的培养特点：

1、 转瓶（管）培养系统 （特点）优点：结构简单，投资少，技术熟练，重复性好，放大只需要简单地增加转瓶（管）数量。

缺点：劳动强度大，占地空间大，单位体积提供细胞生长的表面积小，细胞生长密度低，培养时监测和控制环境条件受限制。

2、反应器贴壁培养 细胞贴附于固定的表面生长，不因为搅拌而跟随培养基一起流动。（特点）优点：比较容易更换培养基，不需要特殊的分离和培养设备。缺点：扩大规模较难，不能直接监控细胞生长情况。

3、 悬浮培养法，主要用于非贴壁依赖型细胞的培养。如杂交瘤细胞、

淋巴细胞、和许多肿瘤细胞等。特点：用于实验室的普通悬浮反应器，是一种带有搅拌器的旋转瓶。

4、固定化培养，固定化培养是将动物细胞与非水溶性载体结合起来，在生物反应器中进行大规模培养的方法。特点：具有细胞生长密度高，抗剪应力和抗污染能力强，细胞易与产物分开，利于产物分离和纯化。

针对与植物细胞培养的区别（即思考题7），动物细胞的培养有一下特点： a.培养基不同：植物细胞（固体培养基），动物细胞（液体培养基）

b.培养基的成分不同：动物细胞培养必须利用动物血清，植物组织培养则不需要。 c.产物不同：植物组织培养最后一般得到新的植物个体，而动物细胞培养因为动物体细胞一般不能表达其全能性，因此得到的是同一种的细胞。

d.原理不同：植物组织培养的原理为植物细胞的全能性，动物细胞培养的原理为细胞的增殖。 营养需求：

①动物细胞培养液的成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。动物细胞培养成功的关键在于培养液中是否含有动物血清，因为由于动物细胞生活的内环

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境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶，可以促进细胞的发育。 ②动物细胞培养液的特点：液体培养基、含动物血清。

③动物细胞培养的条件：无菌、无毒的环境；营养物质（合成培养基）；温度和pH（36.5±0.5℃，7.2~7.4）；气体环境（氧气和二氧化碳）等。

2. 试述动物细胞培养在生物技术中的应用潜力

答：a.生物制品的生产，（酶、生长因子、疫苗和单抗） b.转基因动物的培养 （转基因鱼、转基因小鼠） c.检测有毒物质 d.医学研究

3、简述动物细胞工程技术应用的两面性。 答：

4、举例说明动物细胞培养的目的与用途。 答：

5、简述细胞冷冻的原理和方法。

答：主要冻存方法：超低温保存。

细胞冷冻技术的关键是尽可能地减少细胞内水分，减少细胞内冰晶的形成。快冻慢溶

6、接触抑制与密度抑制有什么异同。

答：接触抑制:细胞从接种到长满容器表面后，由于细胞繁殖数量增多相互接触后，不再增加——接触抑制。

密度抑制: 细胞接触汇合成片后，只要营养充分，细胞仍能进行增殖分裂，但当细胞密度达到一定程度后，营养相对缺乏，代谢产物增多，发生密度抑制现象。

8、试举一例说明细胞建系的全过程（列出主要方法、步骤及所需的仪器设备）。 答：

9、试述动物细胞生物反应器的发展趋势。 答：

第四章

名词概念：

微繁殖：是指在离体培养条件下，将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细胞进行无菌培养，经过不断地切割和重复培养，使其增殖并再生形成完整植株，在短期内获得大量遗传性均一的个体的方法。

繁殖系数：经一次增值培养或在一定时间段内由一个繁殖体所增殖获得的总繁殖体数或苗

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数。

玻璃化：也称超水化作用，是离体培养过程中试管苗发生形态、生理和代谢异常的现象。 褐变：是指组织培养中，由于材料被切割而使多酚氧化酶活化将组织中的酚类物质氧化形成

棕褐色的醌类物质，并向培养基中扩散，抑制培养物生长甚至导致其死亡的现象。 原球茎：兰科植物的种子在萌发初期并不出现胚根，只是胚逐渐膨大，以后种皮的一端破裂，膨大的胚呈小圆锥状，称作原球茎。

茎尖分生组织：指茎尖最幼龄叶原基上方的由2或3层分生细胞组成的很小区域，一般最大直径不超过0.1mm,长度0.25mm，最小的茎尖长度仅有几十微米，有时也称顶端分生组织。 不定芽：相对于顶芽和腋芽，由植物的其他部位或器官、组织上通过器官发生重新形成的、无固定着生位置的芽统称为不定芽。

2、植物离体无性繁殖主要适用于哪些植物？与常规无性繁殖相比有什么优势？

植物离体无性繁殖主要适用于园艺观赏植物、农作物、药用植物及经济林木的种苗生产。 1周期短，便于控制培养条件。繁殖速度快，经济效益高。（2）占用空间小，不受地区、季节限制。（3）繁殖珍稀、濒临苗木和突变体，是优良品种培养的有效途径。（4）利物保持原来品种的特性。

3、离体无性繁殖中,培养物的增殖方式有哪几种？各有何特点？ 离体无性繁殖中,培养物的增殖方式有 4种。

1腋生枝型

特点（1）繁殖率高（2）能保持植物遗传稳定性（3）可缩短林木繁殖周期。 2不定芽型

特点：（1）繁殖率非常高，但繁殖速度较慢； （2）遗传性稳定。

3胚状体发生型

特点：（1）胚状体发生数量多，速度快，结构完整，繁殖系数高；（2）遗传性稳定。 4原球茎型是兰花种子萌发时产生的呈珠 粒状、缩短的、类似嫩茎的器官，可萌发成苗

4、离体无性繁殖一般可分为哪几个阶段？简述其操作的一般程序。 离体无性繁殖一般可分为5个阶段。

1、植株的准备：供体植株应生长旺盛、健壮、不病虫害，并尽可能生长在干净的环境中。 2、无菌培养物的建立：获得无菌材料并诱导外植体生长和发育。包括从供体植株上采取外植体进行消毒、接种及启动外植体生长等程序。

3、 培养物的增殖：通过反复培养使第一阶段获得的数量有限的嫩枝、芽苗、胚状体或原球

茎等培养物的总量增加。

4、 生根培养：将增殖阶段形成的无根芽苗转移到生根培养基上诱导产生不定根，获得健壮

的具有根、芽、茎的完整小植株。

5、 试管苗的移栽及鉴定：移栽是将具根试管苗转移到土壤中的过程，是试管苗从离体培养

逐步适应温室或田间生长环境的过程

5 离体繁殖时外植体选择应注意哪些方面？

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