【A型题】 在五个选项中选出一个最符合题意的答案（最佳答案）。 1．以下哪种物质在PCR反应中不需要（ ）

A．Taq DNA聚合酶 B．dNTPs C．Mg2+ D．RNA酶 E．合适pH缓冲液 2．以下哪种酶可耐高温（ ）

A．Taq DNA聚合酶 B．Hind Ⅲ C．T4连接酶 D．RNA酶 E．Klenow片段

3．PCR反应正确过程应为（ ）

A．退火→变性→延伸 B．变性→退火→延伸 C．退火→延伸→变性 D．变性→延伸→退火 E．延伸→变性→退火 4． PCR技术的本质是（ ）

A． 核酸杂交技术 B． 核酸重组技术

C． 核酸扩增技术 D． 核酸变性技术 E． 核酸连接技术

5．Taq DNA聚合酶酶促反应最适温度为（ ）

A．37℃ B．50℃～55℃ C．70℃～75℃ D．80℃～85℃ E．94℃～95℃

6．温度均一性较好的PCR仪为（ ）

A．水浴锅PCR基因扩增仪和压缩机PCR基因扩增仪 B．半导体PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪 C．压缩机PCR基因扩增仪和半导体PCR基因扩增仪 D．压缩机PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪 E．水浴锅PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪 7．一步就可以摸索出最适合反应条件的PCR仪为（ ）

A．普通PCR仪 B．梯度PCR仪 C．原位PCR仪 D．荧光PCR仪 E．实时PCR仪

8．能在细胞内进行PCR扩增的PCR仪为（ ）

A．普通PCR仪 B．梯度PCR仪 C．原位PCR仪 D．荧光PCR仪 E．实时PCR仪

9．SteadySlope技术是下列哪一家公司的专利技术（ ）

A．eppendorf公司 B．MJ公司 C．Cepheid公司 D．Roche公司 E．ABI公司

10．应用SteadySlope技术的是哪种PCR仪（ ）

A．普通PCR仪 B．梯度PCR仪 C．原位PCR仪 D．荧光PCR仪 E．实时PCR仪

11．在下列哪种PCR仪扩增样品可以了解样品中DNA原始拷贝数（A．普通PCR仪 B．梯度PCR仪 C．原位PCR仪 D．荧光实时PCR仪

）

E．定性PCR仪

12．以下是经过PCR扩增后得到的Ct值，哪个样品的DNA原始拷贝数最多（ ）

A．样品A，Ct = 20 B．样品A，Ct = 22 C．样品A，Ct = 24 D．样品A，Ct = 26 E．样品A，Ct = 28

13．以空气为加热介质的PCR仪是（ ）

A．金属板式实时定量PCR仪 B．96孔板式实时定量PCR仪 C．离心式实时定量PCR仪 D．各孔独立控温的定量PCR仪 E．荧光实时定量PCR仪

14．以下哪个PCR扩增仪的PCR扩增样品槽被设计为离心转子（ ）

A．ABI 7500 B．ABI 7900 C．Light CycleTM D．SmartCyclerⅡ E．RG3000

15．以下哪个PCR扩增仪使用的是同一个激发光源和检测器（ ）

A．ABI 7500

B．ABI 7900 C．Light CycleTM D．SmartCyclerⅡ E．RG3000

16．可以在同一台定量PCR仪上分别进行不同条件定量PCR反应的是（ ）

A．ABI 7500 B．ABI 7900 C．Light CycleTM D．SmartCyclerⅡ E．RG3000

17．拥有独立智能升降温模块的是（ ）

A．ABI 7500 B．ABI 7900 C．Light CycleTM D．SmartCyclerⅡ E．RG3000

18．容纳样品量大，无需特殊耗材的是（ ）

A．ABI 7500 B．ABI 7900 C．Light CycleTM D．SmartCyclerⅡ

E．RG3000

19．PCR基因扩增仪最关键的部分是（ ）

A．温度控制系统 B．荧光检测系统 C．软件系统 D．热盖 E．样品基座

20．“位置的边缘效应”是指（ ）

A．温度的准确性欠佳 B．温度的均一性欠佳 C．边缘升降温速度快 D．边缘升降温速度慢

E．梯度模式和标准模式温度不一致

21．PCR扩增仪升降温速度快有很多优点，以下哪一项应除外（ ）

A．缩短反应时间 B．提高工作效率 C．消除位置的边缘效应 D．缩短非特异性反应时间 E．提高反应特异性

22．在梯度模式下得出最佳反应条件，并以此条件在标准模式下单独做，但结果却不如人意，最有可能的原因是（ ）

A．样品孔温度与设定温度不一致

B．样品孔间的温度有差异 C．样品孔位置的边缘效应较高 D．升降温速度不够快 E．不同模式温度特性有差异

23．定量PCR扩增仪的关机次序一般为（ ）

A．关软件→关PCR仪→关电脑 B．关软件→关电脑→关PCR仪 C．关PCR仪→关软件→关电脑 D．关PCR仪→关电脑→关软件 E．关电脑→关PCR仪→关软件

24、PCR技术扩增DNA,需要的条件是( )

①目的基因 ②引物 ③四种脱氧核苷酸 ④DNA聚合酶等 ⑤mRNA ⑥核糖体 A、①②③④ B、②③④⑤ C、①③④⑤ D、①②③⑥

25、镁离子在DNA或RNA体外扩增反应的浓度一般为（ ） A、0.3-1mmol/L B、0.5-1mmol/L C、0.3-2mmol/L

D、0.5-2mmol/L

26、多重PCR需要的引物对为（ ） A、一对引物 B、半对引物 C、两对引物 D、多对引物

27、PCR是在引物、模板和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应，其特异性决定因素为（ ） A、模板 B、引物 C、dNTP D、镁离子

28、在PCR反应中，下列哪项可以引起非靶序列的扩增的扩增( ) A、TaqDNA聚合酶加量过多 B、引物加量过多 C、A、B都可

D、缓冲液中镁离子含量过高

29、PCR技术是一种DNA的扩增技术。在一定条件下，加入模板DNA、DNA聚合酶、dATP、dCTP、dGTP、dTTP可以实现DNA的扩增。据此判断不合理的是

A．dATP在DNA扩增中可以提供能量，同时作DNA合成的原料

B．dTTP完全水解后产物有胸腺嘧啶、磷酸、核糖

C．DNA扩增过程未加解旋酶，可以通过先适当加温的方法破坏氢键，使模板DNA解旋

D．CTP水解脱去两个磷酸基后是组成RNA的基本单位之一 30、多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。下列有关PCR过程的叙述中不正确的是：（ ） A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现

B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成

C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸 D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高 31、下列有关PCR技术的叙述，不正确的是：（ ） A．PCR技术经过变形、复性、延伸三个阶段 B．PCR技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等

C．PCR技术需在体内进行 D．PCR技术是利用碱基互补配对的原则

32、PCR技术扩增DNA,需要的条件是( )

①目的基因 ②引物 ③四种脱氧核苷酸 ④DNA聚合酶等 ⑤mRNA ⑥核糖体

A、①②③④ B、②③④⑤ C、①③④⑤ D、①②③⑥ 33、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸460个）放入PCR仪中扩增4代，那么，在PCR仪中放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数至少应是

A．640 B．8100

C．600

D．8640

34、对禽流感的确诊，先用PCR技术将标本基因大量扩增，然后利用基因探针，测知待测标本与探针核酸的碱基异同。下图P表示禽流感病毒探针基因在凝胶的电泳标记位置，M、N、Q、W是四份送检样品在测定后的电泳标记位置， 哪份标本最有可能确诊为禽流感 （ ）

A．M B．N C．Q D．W

35、某考古学家在西伯利亚泰加林地区的冰中，发现了一种冰冻的已灭绝的巨大动物的肌肉。他想了解该巨型动物的DNA与现今印度大象的DNA的相似性，于是做了如下检测工作，其中正确的操作步骤及顺序是

①降低温度，检测处理后形成的杂合DNA双链区段 ②通过PCR技术扩增巨型动物和大象的DNA ③把巨型动物的DNA导入大象的细胞中

④在一定的温度条件下，将巨型动物和大象的DNA水浴共热 A.②④③ B.②④③① C.③④① D.②④①

36、 PCR的发明人是

A. Mullis B. 牛顿 C.Kenny D. James

37、 退火温度一般比引物的熔解温度（Tm）低多少合适 A. 7℃ B. 10℃ C. 5℃ D. 2℃ E. 20℃ 38、引物的最佳浓度为

A. 0.1-0.5 μM B. 1-2μM C. 5-10μM D. 100μM E. 20039、专门用于制备单链DNA的PCR技术是 A、对称PCR B、反向PCR C、RT－PCR D、不对称PCR E、嵌套PCR

40、PCR变性温度一般为

A． 96℃ B. 85℃ C. 72℃ D. 55℃ E. 100℃ 41、pre-mRNA 内含子的5'-末端一般为 （ ）

μM A、AU B、GU C、AG D、CG E、AC

42、在大肠杆菌的DNA损伤修复时，对于填补缺口可能最重要的酶是

A、DNA聚合酶Ⅰ B、DNA聚合酶Ⅱ C、DNA聚合酶Ⅲ D、RNA聚合梅 E、以上都不是

43、 可用于扩增未知序列的PCR方法是（ ） A、 对称PCR B、 反向PCR C、 RT-PCR D、不对称PCR E、 嵌套PCR

44、在聚合酶链反应（PCR）中最常用的DNA聚合酶是 A．T4 DNA连接酶 B．T7 DNA聚合酶 C． Taq DNA聚合酶 D．E. coli DNA聚合酶I E．E. coli DNA聚合酶II

45、下列关于PCR引物设计的说法错误的是（ ）

A．设计引物时应考虑使3’端引物和5’端引物具有相似的Tm值

B．每条引物自身不应有稳定的发夹结构 C．上下游引物之间不宜形成稳定的二聚体结构 D．引物的5’和3’端必须和模板严格配对结合 E．引物与非特异扩增区的序列无同源性

46、Taq DNA聚合酶可以不依赖模板在dsDNA的3’末端加上一个碱基为（ ）

A. G B. A C. T D. C E. I

【X型题】 每题的备选答案中有两个或者两个以上正确答案。 1．PCR技术每一个循环均包含以下哪些环节（ ）

A．酶切 B．变性

C．退火 D．延伸 E．连接

2．以下哪些酶可用于PCR反应（ ）

A．Klenow B．Hind Ⅲ C．Taq DNA聚合酶 D．RNase E．DNase

3．目前常用的PCR基因扩增仪控温方式有（ ）

A．水浴锅控温 B．压缩机控温 C．半导体控温 D．离心式空气控温 E．金属控温

4．普通PCR基因扩增仪除通常的定性PCR仪外，还包括（A．水浴式PCR仪 B．梯度PCR仪 C．原位PCR仪 D．变温金属块式PCR仪 E．变温气流式PCR仪

5．按变温方式不同，PCR基因扩增仪可分为（ ）

）

A．水浴式PCR仪 B．梯度PCR仪 C．原位PCR仪 D．变温金属块式PCR仪 E．变温气流式PCR仪

6．目前市场上实时荧光定量PCR仪一般有哪些类别（A．金属板式实时定量PCR仪 B．梯度定量PCR仪 C．原位定量PCR仪 D．离心式实时定量PCR仪 E．各孔独立控温的定量PCR仪

7．下列产品哪些属于金属板式实时定量PCR仪（ ）A．Light CycleTM荧光定量PCR仪 B．ABI 7500荧光定量PCR仪 C．MJ公司Chromo 4荧光定量PCR仪 D．Bio-rad公司iCycler荧光定量PCR仪 E．Rotor-Gene 3000荧光定量PCR仪

8．下列产品哪些属于离心式实时定量PCR仪（ ）

A．Light CycleTM荧光定量PCR仪 B．ABI 7500荧光定量PCR仪 C．MJ公司Chromo 4荧光定量PCR仪 D．Bio-rad公司iCycler荧光定量PCR仪

）

E．Rotor-Gene 3000荧光定量PCR仪 9．PCR基因扩增仪的温度控制主要是指（ ）

A．温度的准确性控制 B．温度的均一性控制 C．退火温度控制 D．升降温速度控制 E．延伸温度控制

10．荧光定量PCR仪的荧光检测系统主要包括（ ）

A．发光二极管 B．激发光源 C．检测器 D．光度计 E．光电倍增管

11．荧光定量PCR仪的荧光强度减弱或不稳定，可能的原因有（ ）

A．滤光片发霉 B．光源损耗 C．半导体模块故障 D．荧光染料污染 E．光电倍增管灵敏度下降 12、PCR实验室应具备至少几个区域

A. 试剂准备区 B. 标本制备区 C. 扩增区 D. 污染处理区 E. 观察区

13、PCR时，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意： A．使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染；

B. 避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面；

C. 操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度；

D. 最后加入反应模板，加入后盖紧反应管；

E. 操作时设立阴阳性对照和空白对照，即可验证PCR反应的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性； 14、关于PCR引物正确的是

A.引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

B. 引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

C. 引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶 核苷酸的成串排列。

D．避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。 E．引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配

对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。 １５、关于Taq DNA聚合酶的生物学活性已下正确的是： Ａ．70～80℃ 150核苷酸/S/酶分子 Ｂ．70℃ 60核苷酸/S/酶分子 Ｃ．55℃ 24核苷酸/S/酶分子

Ｄ．高于90℃时， DNA合成几乎不能进行 Ｅ．温度要先高后低

１６、PCR扩增出现假阳性可能原因是

A. 引物设计不合适 B. 整个基因组或大片段的交叉污染 C. 空气中的小片段核酸污染 D. 试剂或器材均消毒不彻底 E. 退火温度不合适 【A型题】

1．D 2．A 3．B 4．C 5．C 6．E 7．B 8．C 9．A 10．B 11．D 12．A 13．C 14．C 15．C 16．D 17．D 18．B 19．A 20．B 21．C 22．E 23．A 24.A 25.D 26.D 27.B 28.C 29.B 30.C 31.C 32.A 33.B 34. C 35.D 36. A 37. C 38. A 39. D 40. A 41. B 42. A 43. B 44. C 45.D 46.B

【X型题】

1．BCD 2．AC 3．CD 4．BC 5．ADE

6．ADE 7．BCD 8．AE 9．ABD 10．BC 11．ABE 12. ABC 13. ABCDE 14．ＡＢＣＤＥ １５．ＡＢＣＤ 16.ABCD