微生物检验技术考试要点(整理-中级) 下载本文

钟。

24. 大便标本的除菌处理:加抗生素终浓度10 000U/ml,4℃过夜或1000转/ min,离心20分钟。 将含病毒的悬液2000--6000转/ min,离心30--40分钟,可除去90%以上的细胞碎片和杂质。 25. 流式细胞术: (1)一种细胞分选或分析技术。即以荧光素标记抗体结合相应细胞,用激光束激发单行流动的细胞,根据细胞所携带荧光(强度或类别)进行分选或分析。

(2)一种对悬液中细胞、微生物或细胞器等进行单个快速识别、分析和分离的技术。用以分析细

胞大小、细胞周期、DNA含量、细胞表面分子以及进行细胞分选等。

(3) 用荧光剂对细胞特定成分染色,利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞

或生物颗粒进行多参数、快速定量分析,并能对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。

26. 病毒RNA的碱基序列与mRNA完全相同,称为正链RNA病毒,这种病毒RNA可直接起病毒mRNA的作用。病毒RNA碱基序列与mRNA互补者,称为负链RNA病毒,负链RNA病毒的颗粒中含有依赖RNA的RNA多聚酶,可催化合志互补链。

27. 蜡样杆菌能耐受100℃30min。

检验技术资格考试考点精要——微生物学检验(中级下)

101. 炭疽杆菌:最大的致病G+杆菌,菌落灰白色,表面干燥呈“毛玻璃”状,稍隆起,低倍镜下菌落边缘呈明显卷发状如(狮鬃),人工培养呈竹节状长链,不分解乳糖,对碘和氧化剂敏感,有菌体多糖,荚膜多肽,芽胞,炭疽毒素四抗菌素原,质粒编码:毒力因子毒素、荚膜。毒素基因位于大质粒pXO1上,荚膜基因位于小质粒pXO2上,二者是致病必须的。各型均应采血液标本。镜检:革兰、荚膜染色。毒力鉴定:1、质粒电泳图谱分析 2、PCR扩增

其选择培养基是戊烷脒血平板,鉴定试验有:青霉素敏感试验、串珠试验,噬菌体裂解试验(AP631株),重碳酸盐毒力试验(有毒力形成芽胞呈M型)。用1:1000的升汞固定5min。

102. 产单核李斯特菌:有鞭毛,无牙胞对人致病,在羊血平板上β溶血环,25℃有动力,37℃动力缓慢(此特征可作为初步判定),能在4℃进行冷增菌,在半固体中可现倒伞状,致病物质为李斯特菌溶素O,通过胎盘或产道感染新生儿是重要特点,常伴EB病毒引起传单。

103. 结核分枝杆菌:人型和牛型,专性需氧,曾发现G+非抗酸颗粒称Much颗粒,无芽无鞭无荚,烛缸法不适,应用二氧化碳培养皿,常用罗-琴或米氏7H10培养基,35~40℃可长,35~37最适,pH6.5~6.8,18h分裂一代,2~6周才能长出菌落,不发酵糖类,人型的烟酸,硝酸盐还原,烟酰胺酶试验均阳性。可出现Koch现象(初次不发生速发型过敏反应),是Koch在1891年观察到。结核菌素试验红肿硬结:50IU/ml制剂,≤5㎜阴性,≥5㎜阳性;≥15㎜强阳性。结核菌素----旧结核菌素(OT)与结核菌素纯蛋白衍化物(PPD)的通称。

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结核病的诊断依据:临床表现、X线检查特征的肺结核表现、结核菌的痰涂片检查、以及结核菌素试验为主要手段的免疫测试。依赖细胞免疫,迟发超敏反应伴随细胞免疫存在而存在。

结核病动物接种的鉴别诊断所接种的敏感动物---豚鼠,腹股沟皮下。每油镜视野1—9条抗酸菌3+ 结核分枝杆菌,无内外毒素,致病性与其索状因子,蜡质D,分枝菌酸有关。蜡质D为细胞壁主要成份,是一种肽糖脂与分枝菌酸复合物,能引起迟发性过敏反应,并具有佐剂作用。

104. 麻风病原: Hamsen在1937年发现麻风分枝杆菌。具有多形性、抗酸性、聚集性,典型胞内菌。G+,无动力无芽无荚,人是唯一的宿主和传染源,分瘤型和结核型。免疫功能决定了感染后是否发病及临床类型。麻风菌的有效保护性免疫取决于细胞介导的免疫,没有体液免疫缺陷。主要用涂片染色显微镜检查,鼻黏膜或皮损处取材,用抗酸性染色后检查。除临床检查外,皮肤切刮法涂片查菌及组织病理学检查可有助于麻风诊断的确定。一般瘤型和界线类患者标本中可找到细菌在细胞内存在,有诊断意义。结核样型患者中很少找到细菌。

105.空肠弯曲菌:菌体轻度弯曲似逗点状,菌体一端或两端有鞭毛,运动活泼,在暗视野镜下观察似飞蝇。有荚膜,不形成芽胞。微需氧菌,在含2.5~5%氧和10%CO2的环境中生长最好。最适温度为37~42℃。内毒素能侵袭小肠和大肠粘膜引起急性肠炎,致病因素:粘附、侵袭、产生毒素和分子模拟机制(并发症一格林一巴利综合征),产生细胞紧张性肠毒素、细胞毒素和细胞致死性膨胀毒素而致病

临床:腹痛、腹泻、发热,多见散发,是夏秋季腹泻和旅行者腹泻的主要病因之一。主要是污染水、食物。标本采0—5日内用药前,于运送培养基中4小时内检。

分离培养:采样棉拭子涂于万古霉素、多粘菌素的肉汤增菌培养,再接种于哥伦比亚血(5%脱纤维绵羊血)平板上,42℃培养微需氧(85%N、10%CO2、5%O2)2-3天,不溶血、灰色扁平、湿润光泽、像水滴,边缘完整发亮。

病原鉴定:氧化酶、过氧化酶阳性,G—呈S型、螺旋状、纺锤形可初步确定为弯曲菌。再做42℃、25℃生长试验(布氏杆菌肉汤),H2S试验阳性(排除胎儿弯曲菌)、马尿酸盐水试验阳性(排除结肠弯曲菌)。多引物一步PCR扩增法----空肠弯曲菌mapA基因特异彩片段等。

106.铜绿假单胞菌:条件致病菌,需氧,G-杆菌,有鞭毛,20~42℃长,最适产毒温度是26℃,是35℃,4℃不长,液面可形成菌膜,色素有:绿脓素(溶于水和氯仿),氧化酶阳性,液化明胶、还原硝酸盐,在42℃条件下能生长。荧光素是绿色荧光素(溶于水不溶于氯化)。O抗原有两种:1、内毒素脂多糖2、原内毒素蛋白OEP(类属抗原),选择培养基:NAC(乙酰氨基半乳糖)。

107. 流感嗜血杆菌:寄生人体鼻咽部,抵抗力弱,婴幼儿易感,G—球杆菌,用石碳酸复或美蓝单染呈现两端浓染。要新鲜血液(含Ⅹ和Ⅴ因子)培养基,不溶血,可生长在接种于血平板上的金黄色葡

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萄球菌的周围,流感嗜血杆菌菌落较大,越远越小,即卫星现象。在含1%蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露并加有Ⅹ和Ⅴ因子的酚红肉汤培养基中进行发酵试验,是鉴别所有嗜血杆菌菌株的方法。

荚膜是本菌的主要毒力因子,根据荚膜多糖抗原分为a-f 6个血清型,b型致病力最强;依据吲哚试验、脲素反应、鸟氨酸代谢分为:8个生物型,大部分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型,其中以Ⅰ、Ⅲ型为主,血清型b型生物型为Ⅰ型。副流感嗜血杆菌生长只要Ⅴ因子。接种于巧克力色、含脑心浸液的血琼脂平板。病原鉴定方法: 标本:脑脊液、血液、胸水。

108. 军团菌:1976年,USA费城,G—为胞内寄生菌。无芽胞、无荚膜、有鞭毛,需氧菌(5%CO2剌激生长)常规不易着色,最适为36℃,初次分离要L-半胱氨酸,含铁盐可促进生长,主要可用活性碳-酵母浸出液平板(BCYE),不分解糖。水解马尿酸是嗜肺军团菌特征。活性炭酵母浸出液琼脂(含焦磷酸铁、L-半胱氨酸),菌落呈灰白色,如加溴甲酚紫,菌落呈浅绿色。有杂菌用选择培养基(GVPC),是在BCYE中加入甘氨酸、多粘菌素B、万古霉素及放线酮。试管凝集法抗体的阳性标准:1≥320

水是人类感染的主要来源,水样1L,样本采集到浓缩培养最长不超过14天,最好不超过2天。血液、痰、尿6-8℃避光、隔热运送。并取3份,一份酸处理,一份热处理50℃水30分钟。

证实试验:免疫荧光方法。

感染临床主要有2种形式:1、军团菌病LD(肺炎型)2、庞提阿克热PF

109. 克雷伯杆菌:又称肺炎杆菌,以肺炎克雷伯菌多见,G—有较厚荚膜,多数有菌毛,无芽孢和鞭毛,菌体呈卵圆形或球杆状成双排列,有时菌落出现黏液型用接种环可成丝。具有O抗原和K抗原。是人呼吸道及肠道定殖菌,条件致病菌。主要采痰液,用无菌盐水洗3次+等量PH7.6 1%胰酶37度水中90分钟使痰液均质化,

该菌产生胞外毒性复合物(ETC),主要成分为荚膜多糖(63%)、脂多糖(30%)和少量蛋白质(7%)。有些菌株还可产生LT和ST肠毒素。荚膜也与致病力有关。动力和鸟氨酸脱羧酶阴

性是本菌最大特点。

血琼脂培养基、麦康凯,菌落大呈黏液型,光亮黏稠,菌落易融合,发酵乳糖,呈现有色菌落。利用荚膜肿胀试验分型,3型和12型,magA基因作该菌诊断。rmpA基因作该菌辅助诊断。

三亚种区别:IMViC试验:肺炎亚种――++,臭鼻亚种-+-d,鼻硬结亚种-+――。

110. 衣原体:严格真核细胞内寄生的原核细胞型微生物,非运动性的细菌,多少呈球形、堆状,G-,一般寄生在动物细胞内。有独特发育周期,能通过细菌滤器。沙眼,鹦鹉热嗜衣原体,肺炎嗜衣原体。专性细胞内寄生。6-8日龄鸡胚卵黄囊中繁殖,有包涵体。衣原体的两种形态:原生小体(EB,小而致密的颗粒结构,具感染性,姬染紫红色,无繁殖力)。始体(网状体)(RB,大而疏松的结构,衣原体发育中的繁殖体,不具感染性,具增殖力色,丝状分裂增,姬染兰殖),产生类似于G-杆内毒素。培养物中抑制剂----二乙氨基葡聚糖。

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111. 立克次体:以节肢动物为传播媒介,严格细胞内寄生的原核细胞型微生物。人畜共患,立克次体的致病物质主要有内毒素(脂多糖)和磷脂酶 A。免疫是以细胞免疫为主,体液免疫为辅。

培养特性:动物接种是最常用的培养方法 ,采用豚鼠、小鼠可对多种病原性立克次体进行繁殖。鸡胚卵黄囊常用于立克次体的传代。目前常用的细胞培养系统有鸡胚成纤维细胞、L929细胞、Vero细胞,用PCR方法进行鉴定。WHO推荐金标方法----间接免疫荧光方法(IFA)

孵育最适温度为37℃。常用姬姆尼次、姬姆萨染色,多形性,无芽无鞭。标本保存—80或-160℃。雄性豚鼠腹腔接种,39.5以上为特异发热,观察阴囊红肿(流—,地+)

抗原结构:一、可溶性群特异性抗原,与细胞壁表层的脂多糖构成,耐热。另一种为种特异性抗原,与外膜蛋白构成,不耐热。但恙虫病立克次体的细胞壁结构和抗原成分不同,无粘液层、无微荚膜、无肽聚糖和脂多糖,故另立为东方体属。

斑疹伤寒、恙虫病立克次体的脂多糖与普通变形杆菌某些菌株(如OX 19、X2 、OX k 等)的菌体抗原有共同的抗原成分。交叉凝集试验称外斐反应(Weil-Felix reaction),用于立克次体病的辅助诊断。 补体结合试验是立克次体最常用的方法。

(一)普氏立克次体 (P.prowazekii) :是流行性斑疹伤寒的病原体。病人是唯一的传染源,体虱传播媒介,在人与人之间传播

(二)莫氏立克次体(R.typhi) :又名斑疹伤寒立克次体,是地方性斑疹伤寒的病原体。鼠、蚤传播媒介,又称鼠型斑疹伤寒。

(三)恙虫病立克次体 (R.tsutsugamushi) :恙虫病立克次体是恙虫病的病原体。啮齿类动物、兔类、鸟类为传染源。人类通过恙螨幼虫叮咬而感染

112. 支原体:无细胞壁,仅有细胞膜(外,中,内,中间是磷脂,内外是蛋白质及糖)呈高度多形性,能通过滤菌器,最小原核细胞微生物。采样黏膜组织,初次培养最适pH7.6~8.0,在95%N2,5%CO2中生长好,菌落呈“油煎蛋”)样菌落,取样:黏膜组织。分离培养是确诊支原体感染的可靠方法之一,接种平板后用胶纸封保湿,培养基中加入胆固醇、血清蛋白和酵母浸液,加酚红,醋酸铊及抗生素抑菌。Giemsa染色呈淡紫色,Dienes染色呈蓝色不易褪色。40倍镜下可见油滴状菌落,100倍下可见桑椹状菌落。

16种支原体中,肺炎、解脲、人型、生殖器、发酵支原体对人致病,肺炎支原体引起间质性肺炎,其它4种引起泌尿生殖道感染。

快速检测:双抗体夹心ELISA法---检测外膜蛋白、免疫印迹技术---检测抗原

114. 肝炎病毒:甲型(HAV)、乙型(HBV)、丙型(HCV)、丁型(HDV)、戊型(HEV)。 甲型(HAV):正链小RNA病毒科,球形正十二面体,病毒颗粒无包膜,基因组长约7.5kb的正链RNA,核酸RNA有感染性。是在各种条件下抵抗外界变化能力最强的病毒之一。1:4000甲醛液(福尔马林)37度71小时可灭活。粪—口传播。

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