实验二十 细胞活力的测定

一、实验目的及原理：略 二、实验用品：

(一) 材料：新鲜紫鸭趾草花粉或蚕豆原生质体悬液，人口腔上皮细胞。 (二) 用品：荧光显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，烧杯，牙签等。 (三) 试剂：

l、二丙酸酯荧光素溶液：取l0mg二丙酸荧光素于5ml丙酮中，将此溶液逐滴加入 5ml PH5—6生理盐水或0．65M的甘露醇溶液中，直到出现永久性乳白沉淀为止。 2、0．01％吖啶橙的生理盐水溶液。

三、实验方法:

(一) 细胞二丙酸酯荧光素分解酶的活性及细胞活力的测定

二丙酸酯荧光素是非荧光性的亲酯性化合物，很容易进入细胞活力较强的

细胞内，由于细胞内有较强的活性酯酶而将二丙酸酯荧光素中的荧光素分解出来，从而在荧光显微镜下发出了强烈的黄绿荧光，相反活力较弱的细胞，由于酯酶的含量低，表现荧光较弱，而死亡的细胞，由于酯酶活性丧失，不能分解二丙酸酯荧光素，而完全没有荧光，具体方法如下：

l、取少许新鲜紫鸭趾草花粉或蚕豆表皮放在玻片上，加二丙酸酯荧光素溶液一滴，

5一lO分钟后，在荧光显微镜下观察，时间不宜太长，以免细胞逐渐死亡，影响效果。

2、若着染是悬浮细胞，可将上述染色液数滴直接加入细胞培养液5分钟后，可离

心收集。再用无细胞和无染料的培养液洗二次，即可收集观察。上述染过的细胞可保存在4℃左右的冰箱中，直到细胞死亡前故可观察。 (二) 吖啶橙鉴定细胞死活

细胞经吖啶橙染色，在激发光作用下，活细胞核呈黄绿色或亮绿色荧光，而

细胞质为淡红色，但含有粘多糖的细胞在其细胞质中出现桔黄色颗粒，或整个细胞质呈桔黄桔红色荧光，死细胞其核呈红色荧光其操作方法如下：

用牙签取少许口腔粘膜上皮细胞，涂在载玻片上，滴加1—2滴0．1％吖啶

橙生理盐水溶液，加盖玻片，待染色5分钟后于荧光显微镜下观察，注意细胞核所呈荧光颜色。

四、作业：

说明你所检查的细胞活力状况。

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