AU系列生化分析仪参数详解 下载本文

图6 完整的数据监测常规界面示意图

这张所谓的完整图示,其实也没有13-27点的数据。不过屏幕左侧是完整的,上面清晰的告诉我们,样本测试的日期、校准日期、photocal日期和试剂空白日期。不过这个项目采用的END1方法,所以没有试剂空白数据。

这个结果的反应曲线如下:

图7 反应曲线示意图

上图绿色线条是付波长曲线,蓝色线条是主波长反应曲线,红色线条是反应曲线,也就是主波长减去付波长的拟合线,但图中没有设置显示。由于这是厂家说明书上的演示,所以measuring point-1 测量点1选择的是0-1,measuring point-2没有选择,因为是单试剂。这个读点选择的很有意思,P0点加入R1开始,加入样本后的第一点P1就结束,后面的曲线都是瞎忙活,早就测试完了。就算ALB反应快,但也不至于此。

2、测试方法:AU系列测试方法有终点法、速率法和固定点法。

2.1 终点法:终点法在测试方法选择里有END和END1两个选项。

END是试剂空白校正,也就是测定样本的吸光度值减去该点试剂空白的吸光度值。

END1是水空白校正,也就是测定样本的吸光度值减去该点水空白的吸光度值。

当然,二者都可以选择或者不选择双波长校正,而且二者都可以选择一组读点还是两组读点,以形成一点终点法还是两点终点法。

图8 一点终点法示意图

图9 两点终点法示意图

R1.V是R1试剂的体积;

S.V是样本的体积;

R2.V是R2试剂的体积;

Pz是第一读点,也叫初始读点,在参数设置里是Measuring Point-1,在终点法里是R2之前之后各一个点;

Px是第二读点,也叫最后读点,在参数设置里是Measuring Point-2,在终点法里不使用这组读点。

在如果不使用R2,也就是单试剂,是图8的示意图,第一读点一般选择0-27,第二读点不选择,这样结果会扣除R1的空白。如果选择END方法,则两个点都要减去该点的试剂空白后再相减。由于第一读点本来就是R1的空白,理论上应该与试剂空白P0的是数值相差无几甚至完全相等,所以只需要第二读点减去该点的试剂空白即可。

如果选择END1方法,那么两点的数值均要减去水空白。理论上水空白的曲线是一条水平直线,所以两点减去的值都相同,然后两点间再相减,得出的吸光度值用于浓度计算。

要注意的是:AU640和AU680对Measuring Point的概念是不同的,前者Measuring Point-1是主读点, Measuring Point-2是前一点,也就是空白点。而后者正好相反。Measuring Point两组点都选择,是给双速率法和双固定点法准备的,终点法用不上。

在图9中,是双试剂终点法,需要试剂样本空白,也就是R1+S的空白,所以第一读点的Fist应该在R2加入之前的一个点,也就是图中的Pz,一般选择P10读点;Px则是第一读点的Last点,反应结束的点。

终点法的反应OD值计算公式是:

反应OD=(Px-K2*P0)-(K3*Pz-K2*P0)

K2是R1体积和总反应量的比值,也就是R1.V/(R1.V+S.V+R2.V);

K3是R1+S的体积和总反应量的比值,也就是(R1.V+S.V)/(R1.V+S.V+R2.V)。

图5中的光路校正其实就是这个K值,由于参数不全,无法计算反推罢了。

如果选择是END方法,而且Measuring Point-1的都选择上的话,那就是两点终点法扣除试剂空白,公式就成为:反应OD=(Px-RBPx)-K3(Pz-RBPz)

也就是各点的吸光度值减去各点的试剂空白吸光度值,再进行体积系数校正。

如果选择是END1方法,而且Measuring Point-1都选择上的话,那就是两点终点法扣除水空白,公式就成为:反应OD=(Px-WB)-K3(Pz-WB)=Px-K3Pz

我们常常习惯使用测量点吸光度值减去水空白(或者杯空白)的方法,并不习惯减去试剂空白,所以END1方法在国内采用的很多。而END减去试剂空白的方法,由于试剂原因和执行时间的问题导致一些结果出现负值,特别是低值标本。

闹得沸沸扬扬的免疫比浊项目用终点法都在R2之后的问题,大可不必使用两点终点法,直接使用一点终点即可,只设置Measuring Point-1(例如:Fist0-Last27)。而非要使用两点终点法,那就只能R2之前之后各一组点,这毫无疑问

见过很多实验室里的试剂空白都是空的,根本不做,因为方法都采用END1、RATE1和FIXED1。

在终点法当中,无论采用一点还是两点,亦或是END还是END1,都有一个先天不足,那就是样本本身的空白无法排除,有的样本本身的颜色就很深,加入试剂后反应度很小,可能会造成假阳性。为了解决这个问题,AU可以采用样本空白校正(sample blank correction)。

在菜单Parameters>Common Test Parameters>Test Name中,选择点击下面的Sample Blank,就会出现样本空白界面,一共只能选择10个项目,分别选择每一个项目的颜色和空白项目名称,然后保存。在进行这个项目测试的时候,就会先占用一个反应杯,用去离子水做试剂稀释样本进行样本本身颜色的比色(样本空白),然后再占用一个反应杯,用参数设定的试剂进行比色(颜色反应),最后颜色反应的吸光度值减去样本空白的吸光度值。

样本空白的计算公式是:反应OD=ODC-K*ODB

ODC是该点的颜色反应吸光度值;

ODB是该点的样本空白吸光度值;

K是样本空白体积和颜色反应体积的比值,一般是1。

根据END或END1方法的不同,还要分别减去该点的试剂空白或者水空白。下图就是样本空白校正的示意图:

图10 样本空白校正示意图

2.2 速率法 Rate:AU中, 有Rate和Rate1两个速率法选项。

Rate,是扣除试剂空白的速率法;

Rate1,是扣除水空白的速率法;

速率法可以使用单速率法和双速率法两种方法。

图11 速率法示意图

当使用单速率法时,只有上图的△OD2,参数中只选择Measuring Point-1就行了,给出开始和结束的两点,仪器根据这两点计算每分钟吸光度变化。这也是最常用的速率法。

当使用双速率法时,就要在R2加入之前选择两个点,作为Measuring Point-1的值,然后在Measuring Point-2里输入R2之后的两个点,这样前者是△OD1,后者是△OD2,计算公式时:

反应OD=(△OD2-△OD1)/min

当然,Rate方法要减去各点的试剂空白再计算△OD,Rate1要减去水空白再计算△OD。

与终点法一样,大多采用Rate1方法。

线性范围(Linearity Limit):在速率法当中,线性检查是必要的。根据速率法选择的读点数不同,系统将全部读点一分为二,分前半程和后半程两部分分别进行△OD/min计算,然后二者再进行公式计算。

图12 速率法线性检查示意图

前半程的△OD/min为△E1,后半程的△OD为△E2,在菜单参数设置里面有个Linearity Limit选项, [|(△E1-△E2)|÷|(△E1+△E2)/2|]*100≤Linearity Limit为正常线性,否则判断为线性错误,结果有*号提示。这是第一个线性判断依据。

第二个线性判断依据是|(△E1-△E2)|≤0.003,否则也会判断为线性错误。这个0.003是系统默认值。也就是说前半程和后半程的△OD/min差值绝对值不能超过0.003(Q键菜单中的Decision of Linearity Check设置)。

逆向反应检查(Reverse Reaction Check):在速率法反应中,逆向检查也很有必要,如果在读点范围内有任何一个点出现反转,哪怕是整个读点区的反应趋势没有改变,都会被监测到,在结果中用* 号提示。