6. 微载体:微载体是直径60-250um的适用于贴壁依赖型细胞生长的微珠，一般是由天然
葡聚糖或者各种合成的聚合物组成
7. 细胞工程：指以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的的利
用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性学科 8. 细胞系：是由原代培养经传代培养纯化，获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存
的不均一的细胞群体。第一次传代培养后的细胞即称之为细胞系。
9. 细胞株：指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单
细胞增殖形成的细胞群。
10. 原代培养：接种组织块直接长出单层细胞或将组织分散成单个细胞再进行培养，在首次
传代前的培养称为原代培养。
11. 传代培养：指将原代培养的细胞继续转接培养的过程（细胞的体外大量增殖以及细胞系
的建立是通过传代培养实现的） 12. 细胞融合有哪些方法：
（１） 物理法：离心、震动、电融合诱导法 （２） 化学法：用聚乙二醇（ＰＥＧ）诱导
（３） 灭活的病毒（生物法）：仙台病毒、疱疹病毒等 13. 动物细胞培养应用
（1） 杂交瘤技术产生单克隆抗体 （2） 重组蛋白的生产应用：
1哺乳动物细胞培养生产重组蛋白药物：○中国仓鼠卵巢细胞ＣＨＯ、鼠源骨髓瘤
ＮＳＯ、小鼠骨髓瘤ＳＰ２细胞
2动物细胞培养生产重组人红细胞生长素 ○
（3） 红细胞生成素（ＥＰＯ）：是细胞因子的一种，在骨髓造血微环境下促进红细胞
的生成，是对红细胞的生成有增强作用的体液性因子
1动物接种○2鸡胚、鸭胚接种○3细胞培养法 （4） 病毒疫苗的生产方法：○
14. 促红细胞生成素（ＥＰＯ）：属于基因兴奋剂，可以增加人体内的红细胞数量，从而使
肌肉获得更好的氧供，增强运动员的耐力。(长期食用可使人体血液粘稠，增加心脏负担，导致血液凝固、血栓等心血管疾病，甚至死亡） 15. 组织工程的三大要素：种子细胞、支架材料、细胞因子
16. 骨组织修复的支架材料：天然生物聚合物（蛋白质支架、多糖支架）、无机类生物材料
支架（磷酸钙基生物材料、硫酸钙基生物材料） 17. 引起细胞凋亡的因素：
（１） 有毒物质或抑制因子产生
氨：来自培养基和代谢，积聚影响细胞生长
乳酸：来自细胞的糖代谢，抑制乳酸脱氢酶，抑制糖酵解，能量产生减少，抑制细胞生长
甲基乙二醛：脂类、氨基酸的代谢产物，对细胞有潜在的损伤作用 ＣＯ２：毒性
（２） 营养成分耗尽：如谷氨酰胺的耗竭是最常见的凋亡原因，而且凋亡一旦发生，
补加谷氨酰胺已不能逆转凋亡。另外，动物在无血清、无蛋白培养基中进行培养时，细胞变得更为脆弱，更易发生凋亡
（３） 其它物理因素：渗透压、PH、温度、载体、搅拌等 18. 包埋：是人工种子制作的重要一环（干燥法、水凝胶法）
海藻酸盐包埋：
1包埋液（人工胚乳）制备：２％－３％的海藻酸钠和营养物、生长因子等 ○
2将成熟的健康的体细胞胚胎与包被液相混合，然后将其滴入适当浓度的氯化钙溶液中，○
经过胶复合作用的造型过程，在２０－３０分钟内形成内含细胞胚、有一定硬度的雏形人工种子。
基因工程
1. 基因克隆过程：
1分：从复杂的生物有机体基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有○
目的基因的DNA片段
2切：用限制性核酸内切酶分别将外源ＤＮＡ（包括外源基因或目的基因）和载体分子○
切开
a) 酶切反应温度：３７℃ b) 使用酶：限制性核酸内切酶
3连：在体外,将带有目的基因的外源DNA片段连接到能够自我复制的并具有选择记号○
的载体分子上,形成重组DNA分子 a) 温度：１６℃ b) 使用酶：ＤＮＡ连接酶
4转：将重组DNA分子转移到适当的寄主细胞，并与之一起增殖 ○
5选：短时间培养转化细胞，以扩增DNA重组分子，或使其整合到受体细胞的基因组○
中
6鉴：从这些筛选出来的受体细胞克隆中,提取出已经得到扩增的目的基因,供进一步分○
析研究使用。
筛选和鉴定转化细胞，获得使外源基因高效表达的基因工程菌或细胞
将目的基因克隆到表达载体上,导入寄主细胞,使之在新的遗传背景下实现功能表达,产生出人类所需要的物质.
2. 限制性核酸内切酶 （37℃）
（1） 定义：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此处切割
DNA双链的核酸内切酶
（2） 寄主控制的限制与修饰现象：限制功能：外源ＤＮＡ的切割功能；修饰功能：自身
ＤＮＡ的甲基化
（3） 活性单位：５０ｕｌ反应体系中，含１ｕｇ底物DNA，于最适反应条件和温度下，
保温1小时，能使1ugDNA完全降解所需的酶蛋白即为一个酶单位，用U表示 （4） Ⅱ类限制性内切酶：从流感嗜血菌中分离出来
1识别位点序列：未甲基化修饰的双链ＤＮＡ上的特殊靶序列○
2切割位点：在识别位点处切开双链ＤＮＡ。形成黏性末端或平末端 ○
3条件：不能用水稀释，以免变性失活； ○
预先加入除酶以外的其他试剂； 取酶后立即放于冰上
（5） 限制酶酶切反应的终止：大多数酶可用６５℃温育５分钟
3. 限制性内切酶：是微生物细胞中用于专门水解外源ＤＮＡ的一类酶，其功能是避免外源
ＤＮＡ的干扰或噬菌体的感染，是细胞中的一种防御机制 4. 同裂酶：识别位点的序列相同的限制性内切酶
（1） 完全同裂酶：识别位点和切点完全相同 （2） 不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同