2． 蛋白质的构象 3． 蛋白质变性及复性 4． motif

5． 别构作用（变构作用）

6． 蛋白质变性与沉淀和凝固的区别

四、问答题

1． 就蛋白质的?-结构而论，侧键R基团指向什么方向？为什么一种稳定的?-结构需要侧链

R基小的氨基酸？

2． 测定蛋白质一级结构的基本步骤有哪些？ 3． ?-螺旋的结构特点是什么？

4． 何为氨基酸的等电点？如何计算精氨酸的等电点？（精氨酸的 α－羧基、α －氨基和胍

基的pK值分别为2.17，8.04和12.48） 5． 怎样理解亚基缔合对蛋白质功能的影响？

6． 什么是蛋白质的二级结构？它主要有哪几种？各有何特征？ 7． 引起蛋白质变性的作用及作用机制有哪些？ 8． 简述蛋白质盐析的基本原理

8

参考答案

一、选择题

l．D 2．B 3．C 4．A 5．C 6．A 7．D 8．E 9．A 10．C 11．D 12．C 13．C 14．B 15．C 16．A 17．C 18．C 19．E 20．E 21．A 22．C 23．E 24．A 25．E 26．C 27．E 28．A 29．E 30．B 31．D 32．C 33．D 34．E 35．C 36．C 37．D 38．E 39．C 40．D 41．D 42．A 43．D 44．C 45．B 46．A 47．C 48．D 49．A 50．D 51．A 52．C

二、填空题

1． 盐溶，盐析 2． 等电点

3． Arg，Lys，His

4． 肽键，肽键， ?-羧基，?-氨基，共价键 5． 共价键，单链，非共价键 6． 空间结构

7． ?-螺旋，?-结构，?-转角，无规则卷曲

8． 疏水作用，氢键，盐键，Cys，–SH，二硫键

9． 种类，空间排布，相互作用，接触部位疏水作用，氢键，盐键 10．溶解度，pI，pH，离子强度

11．肽链中的氨基酸排列顺序，基因上遗传信息 12．一级结构

13．理化性质，生物活性

14．C?-C，C?-N，平面，平面，构象 15．>C=0，>NH，链内氢链

16．>C=0，

17．R基团的大小，荷电状态，形状，Pro，Gly 18．>C=0，>N-H，上方，下方

19．4个，第一个，>C=0，第四个，>NH

20．?-螺旋，反平行的?结构，Cys，His，配介，?-螺旋 21．结构，功能，相对松弛，无规则卷曲，相对运动，运动

22．疏水基因，烃基，苯环，亲合力，亲水基因，羟基，羧基，酰胺基，氨基，胍基，咪唑

基，亲合力

23．疏水侧链，亲水侧链，极性侧链

24．立体排布，相互作用，接触部位，空间结构

25．功能，特殊功能，活性，空间构象，空间构象，一级结构 26．蛋白质变性，蛋白质变构

27．构象，构象，生物活性，功能，活性 28．生物活性，溶解度，物理化学

9

29．卷曲，伸展，共价键，弱的非共价键，构象，生物活性 30．构象的破坏，生物活性的丧失 31．热振荡，氢键，不可逆 32．亚基，生物活性

33．氨基酸，折叠，盘曲，空间，特定构象 34．亲缘，差异数，种属差异，结构，亲缘 35．氨基，羧基，Glu，Asp，Arg，Lys，His 36．H+，H+，正电荷，H+，负电荷 37．正电荷，负极，正极

38．所带电荷的性质，数目，大小，形状 39．16%，L-?-氨基酸，20 40．肽键，?-羟基，?-氨基

41．?-NH2，?-COOH，氨基酸残基 42．多肽键中氨基酸排列顺序，肽键

43．侧链基因的相互作用，氢键，盐键，疏水作用，二硫键 44．亚基

45．离子，负电荷，正电荷，兼性离子 46．水化层，电荷

47．盐析，有机溶剂法，调节溶液pH至蛋白质的pI 48．酪氨酸，色氨酸，测定溶液中蛋白质含量 49．别构，4，?链，?链

50．清蛋白，?1球蛋白，?2球蛋白，?球蛋白，?球蛋白

三、简答题

1． 蛋白质分子中的多个氨基酸是通过肽键相连接的，形成链状分子称多肽链。肽键是一分

子氨基酸的??羧基与另一分子氨基酸的??氨基脱水缩合形成的酰胺键(一CO—NH一)，属共价键。肽键是蛋白质结构中的主要化学键，此共价键较稳定，不易受破坏。多肽链有两端，有自由??氨基的一端称氨基末端或??N—端；有自由??羧基的一端称为羧基末端或??C—端。

2． 各种天然蛋白质分子的多肽链是在一级结构的基础上通过分子中若干单键的旋转、盘

曲、折叠形成特定的空间三维结构，又称为蛋白质的空间构象。构象是指在三维空间中分子中各个原子相互之间的关系，构象改变时只涉及稳定原构象的非共价键断裂及再形成，而不涉及共价键的改变。各种蛋白质的理化性质和生物学活性主要取决于它的特定空间构象。蛋白质的构象包括主链构象和侧链构象。包括：蛋白质的二级结构;三级结构;四级结构。

3． 蛋白质的变性：蛋白质在某些理化因素的作用下，蛋白质严格的空间构象受到破坏，从

而改变其理化性质，并失去其生物活性，称为蛋白质的变性。蛋白质变性具有可逆性，当蛋白质变性程度较轻，可在消除变性因素条件下使蛋白质恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性。但是许多蛋白质或结构复杂或变性后空间构象严重破坏，不可能发生复性，称为不可逆性变性。

4． 在蛋白质分子中特别是球形蛋白质分子中，经常有若干个相邻的二级结构元件组合在一

起，彼此相互作用形成种类不多的、有规律的二级结构组合或二级结构串，在多种蛋白

10

质中充当三级结构的构件，称为超二级结构或模序。如螺旋－环－螺旋、锌指结构等。 5． 变构效应：由于蛋白质分子构象改变而导致蛋白质分子功能发生改变的现象称为变构效

应。引起变构效应的小分子称变构效应剂。协同效应：一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一亚基与配体的结合能力，称为协同效应。如果是促进作用则称为正协同效应；反之则为负协同效应。

6． 蛋白质在某些理化因素的作用下，蛋白质严格的空间构象受到破坏，从而改变其理化性

质，并失去其生物活性，称为蛋白质的变性。变性后由于肽链松散，面向内部的疏水基团暴露于分子表面，蛋白质分子溶解度降低并互相凝聚而易于沉淀，其活性随之丧失。蛋白质的沉淀和凝固：蛋白质分子相互聚集而从溶液中析出的现象称为沉淀。变性后的蛋白质由于疏水基团的暴露而易于沉淀，但沉淀的蛋白质不一定都是变性后的蛋白质。加热使蛋白质变性时使其变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中，这种现象称为蛋白质的凝固，凡凝固的蛋白质一定发生变性。

四、问答题

1. 肽链近于充分伸展的结构，各个肽单元以C?为旋转点，依次折叠，侧面看成锯齿状结

构。肽链成平行排列，相邻肽段的肽链相互交替形成氢键，这是维持β—折叠构象稳定的主要因素。肽链中的氨基酸残基的R侧链垂直于相邻的两个肽平面的交线，交替地分布于β—折叠的两侧。就丝心蛋白而论，由Gly和Ala交替构成的多肽链在一面都是H，而在另一面都是甲基，而且位于同一面的R基因相互邻近。只有当氨基酸侧链很小时，它们才能契入到?-结构中，使β—折叠稳定。 2． 本步骤有：

⑴ 蛋白质样品的准备

①测定蛋白质分子中多肽链的数目 根据蛋白质N—末端或C—末端残基的摩尔数和蛋白质的相对分子质量可以确定蛋白质分子中的多肽链数目。

②拆分蛋白质分子的多肽链 如果蛋白质分子是由一条以上多肽链构成的，则这些链必须加以拆分。可用变性剂如8mol／L尿素，6mol／L,盐酸胍或高浓度盐处理打开共价键，就能使寡聚蛋白质中的亚基拆开；用氧化剂或还原剂将二硫键断裂。 ③用相应的方法分离纯化各亚基

⑵ 分析每一多肽链（亚基）的氨基酸组成

①裂解多肽链成较小的片段 用两种或几种不同的断裂方法(指断裂点不一样)将每条多肽链样品降解成两套或几套重叠的肽段或称肽碎片。

②每套肽段进行分离、纯化，鉴定多肽链的N—末端和C—末端残基。以便建立两个重要的氨基酸序列参考点。

③测定各肽段的氨基酸序列 目前最常用的肽段测序方法是Edman降解法，并有自动序列分析仪可供利用。此外尚有酶解法和质谱法等。 ⑶ 排列成完整的氨基酸序列结构

①重建完整多肽链的一级结构 利用两套或多套肽段的氨基酸序列彼此间有交错重叠可以拼凑出原来的完整多肽链的氨基酸序列。 ②确定半胱氨酸残基间形成的S--S交联桥的位置。 应该指出，氨基酸序列测定中不包括辅基成分分析，但是它应属于蛋白质化学结构

3．⑴ 各肽链以C?原子为转折点，以肽链平面为单位，形成稳固的右手螺旋。

⑵ 每螺旋有3．6个氨基酸残基，螺距约0．54nm，每个氨基酸残基绕螺旋中心轴放置

11