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(六)茶叶中游离氨基酸总量的测定—茚三酮显色法

一:原理

氨基酸是水溶性物质,在索伦逊缓冲溶液中与茚三酮同时加热,形成紫色的络合物。

二:试剂的配制

1. 2%茚三酮溶液:称取茚三酮1g,溶于25ml水中,加氯化亚锡(SnCl2.2H2O)

40mg,溶解冷却后加水定容至50ml,置于暗处。24h后摇匀,过滤。溶液置于暗处,可用数月。

2. 索伦逊缓冲溶液:pH=8.0 取测多酚的缓冲溶液A95ml,加B溶液5ml,混

匀。

A. 1/15M的Na2HPO4溶液:称取磷酸氢二钠(Na2HPO4.2H2O)11.876g或(Na2HPO4.12H2O)23.876g,加水溶解并稀释至1升。

B. 1/15M的KH2PO4溶液:称取经110℃烘干2h的KH2PO4 9.078g,加水溶解

并稀释至1升。

三:测定方法

1. 试液制备

(1) 原料样的处理同多酚测定

(2) 速溶茶样品:称取速溶绿茶1g左右,红茶0.8g左右,普洱茶1.1g左

右,加水溶解定容至100ml。

2. 取1ml试液,注入25ml容量瓶中,加索伦逊缓冲溶液0.5ml,2%茚三酮溶液

0.5ml,于沸水浴中加热反应15min,冷却后加水定容,放置10-15min,于570nm波长处,用0.5cm比色杯,试剂空白作对照,测其吸光度A。

四:计算

氨基酸(mg/100g)=(0.57×A×L1/L2)/(M×m)×100

A—光密度 M—试液量(g)

m—试液干物率(%)

L1—总试液量(ml) L2—所取试液量(ml)

(七)黄酮类化合物分析—三氯化铝比色法

一:原理

三氯化铝与黄酮类化合物作用后,生成黄酮的铝络合物为黄色,黄色的深浅与黄酮的含量呈一定比例关系。

二:试剂

1%三氯化铝:称取三氯化铝(AlCl3.6H2O)1.7567g或AlCl30.9709g,加水溶解并稀释至100ml。

三:测定方法

1. 试液制备:原料样同前,速溶产品如蒲公英称取约1g,用水溶解并定容至100ml。

2. 测定:吸取试液0.5ml,加1%三氯化铝溶液至10ml,摇匀,静置10min后比色,以试剂空白作参比,用1cm比色杯,于420nm波长处测其吸光度A。

四:结果计算

黄酮甙(mg/g)=(A×320×L1/L2)/(M×m)/1000

A—光密度 M—试液量(g)

m—试液干物率(%)

L1—总试液量(ml) L2—所取试液量(ml)

(八)葡萄籽提取物中原花青素含量的测定 一:测定步骤

1. 精确称取葡萄籽提取物50mg左右,用甲醇溶解至50ml。 2. 取上述溶液1.0ml,用甲醇稀释至10ml,即得检测液。 3. 试剂甲的配制:正丁醇/盐酸38%=95:5(V/V),将95ml正丁醇与5ml38%

的浓盐酸混合即可。

4. 试剂乙的配制:2%的NH4Fe(SO4)2.12H2O/2NHCl溶液(W/V),溶解2g

NH4Fe(SO4)2.12H2O至100ml2NHCl溶液中。

2NHCl的配制:取38%的浓盐酸1.67ml,用水定容至10ml。

5. 在10ml带塞离心管,精确加入1ml检测液,6ml试剂甲和0.2ml试剂

乙,然后塞上塞子,在沸水中加热40min。

6.待测试液冷却后,在546nm处用1cm比色杯测定吸光度A。

二:计算

原花青素(%)=A/(0.01389×0.366×W)

(九)红车轴草提取物中异黄酮的UV测定

一:测定步骤

1. 准确称取对照品和样品100mg置于100ml容量瓶中,加乙醇溶解,冷却定容

至刻度。

2. 准确吸取上述溶液0.5ml置于25ml容量瓶中,加无水乙醇(或95%乙醇)稀释

至刻度,摇匀。以乙醇为空白,在250nm波长处,用1cm石英比色杯测其吸光度A。

3. 比较样品吸光度与对照样吸光度的大小。

(十)云芝多糖含量的检测方法

取云芝提取物0.2克,加30ml浓盐酸水解,水解液用20%NaOH中和至PH=7,加水定容至100ml,取5ml加入碱式酒石酸铜溶液,放置2分钟,加水定容至50ml,于625nm处测定吸光度,由标准曲线计算云芝多糖的含量。以灵芝多糖作为标准品按上述方法制作标准曲线。

注:该方法由田杰提供

(十一)人参皂甙的测定方法

1. 试剂

1.1 甲醇、冰醋酸、高氯酸 1.2 5%香草醛-冰醋酸溶液 1.3 人参皂甙Re对照品 2. 操作步骤

2.1 对照品的制备 精密称取人参皂甙Re对照品20mg置10ml容量瓶中,加甲

醇至刻度,摇匀,作为对照品溶液(每1ml中含人参皂甙Re对照品2 mg) 2.2 供试品溶液的制备 取样品适量(约相当于人参皂甙20mg)精密称定置

10ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为待测液。

2.3 测定方法 精密吸取待测溶液与对照品溶液各25μl,分别置10ml具塞试管

内,在水浴中挥尽溶剂,立即取出,精密加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml,摇匀,置600C水浴中加热15分钟,取出,立即以流水冷却2分钟,精密加冰醋酸5ml,摇匀,以相应的试剂为空白,在550nm处测定吸光度。 3.计算

花旗参皂甙含量(%):A样*C标*100

A标*W样*1000

式中:A样——样品溶液的吸光度;

A标——对照品溶液的吸光度; C标——对照品取样量; W样——样品取样量(g)。