第 9 页 共 80 页
盐酸与重碳酸钠接触产生CO2。
⑶ 微需氧培养法： 5~6 %O2 、5~10%CO2和85%N2
有些微需氧菌，如空肠弯曲菌、幽门螺杆菌等，在低氧分压的条件下生长良好。可用抽气换气法即用真空泵先将容器内的空气排尽，然后注入5~6%O2、5~10%CO2、85%N2气体，然后放入37℃孵箱孵育。
⑷ 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等。
10、按物理性状不同可将培养基分哪几种？各有何主要用途并简述细菌在其中的生长现象。
培养基按其物理性状可分为固体培养基、半固体培养基与液体培养基三种。分别观察下列生长现象：
⑴ 固体培养基：细菌得以分离培养生成菌落从而获得纯种，主要用于细菌的分离纯化、鉴定以及药敏试验。菌落分为三型：① 光滑型菌落（S型菌落）；② 粗糙型菌落（R型菌落）；③ 粘液型菌落(M型菌落)。
⑵ 半固体培养基：多用来检查细菌的动力和短期保存细菌。有鞭毛的细菌可由穿刺线向四周运动播散，培养后穿刺线模糊不清，呈羽毛状或云雾状混浊生长；无鞭毛的细菌，不能运动，仅沿穿刺线生长，穿刺线清晰，穿刺线以外的培养基仍透明澄清。
⑶ 液体培养基：主要用于大量繁殖细菌（增菌培养）和观察某些细菌的生化反应。细菌在液体培养基中生长呈三种状态。①混浊生长，见于大多数细菌；②沉淀生长；③菌膜生长，多为专性需氧菌，在培养液表面生长，形成菌膜。
11、按用途不同可将培养基分为哪几种？请各列出一种常用的培养基。 ⑴ 基础培养基：如营养肉汤、营养琼脂、蛋白胨水等 ⑵ 增菌培养基：
① 通用增菌培养基：如血平板、血清肉汤等。
② 专用增菌培养基：如碱性蛋白胨水用于霍乱弧菌的增菌。
⑶ 选择培养基：如SS平板、伊红-美兰琼脂平板、亚碲酸钾血琼脂平板、TCBS等。 ⑷ 鉴别培养基：如糖发酵管、双糖铁培养基等。 ⑸ 厌氧培养基：如庖肉培养基、硫乙醇酸盐肉汤等。
12、简述甲基红试验、V-P试验、七叶苷水解试验、靛基质（吲哚）试验、硫化氢试验、尿素酶试验、枸橼酸盐利用试验的原理、培养基、方法、结果与应用。 甲基红试验：
原理：葡萄糖 → 丙酮酸 → 大量混合酸 → pH降至4.4以下 → 加入甲基红试剂，培
养基变红为阳性。
培养基：葡萄糖蛋白胨水 试剂：甲基红试剂
方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，培养2-4d，于培养基内加入甲基红指
示剂2d，立即观察结果。
结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性。
应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴别。如大肠埃希菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。 V-P试验：
原理：葡萄糖 → 丙酮酸 → 脱酸生成中性的乙酰甲基甲醇 → 在碱性环境中被空气中
的氧氧化成二乙酰 → 二乙酰再与培养基内蛋白胨中的精氨酸所含的胍基反应，生成红色化合物为阳性。
宜春学院医学院 杨婧编写
9
第 10 页 共 80 页
培养基：葡萄糖蛋白胨水
方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35 ℃培养48h后加入甲液(5％α-萘酚酒精溶液)和乙液(40％KOH溶液+0.3 ％肌酐)，振摇。
结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于35℃4h后仍如故者即为阴性。 应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴别。该试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性
的细菌，后者通常为阴性。
七叶苷水解试验：
原理：某些细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，七叶素与培养基中枸橼酸铁中的二
价铁离子反应，生成黑色的化合物，使培养基呈黑色。 培养基：七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基。
方法：将待检菌接种于七叶苷培养基中于35℃培养48h后观察结果。 结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。
应用：主要用于D群链球菌与其它链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。也可用于革兰
阴性杆菌（克雷伯菌属、肠杆菌属和沙雷菌属）、肠球菌及厌氧菌的鉴别。
靛基质（吲哚）试验：
原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与
试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。 培养基：蛋白胨水培养基
试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）
方法：挑取纯培养物接种蛋白胨水培养基，于35℃培养24 ~48h后，沿管壁徐徐加入靛
基质试剂0.5ml，使成两层，观察结果。
结果：加入试剂后，两者液面接触处出现红色为阳性；无色为阴性。 应用：用于肠杆菌科细菌的鉴定。 硫化氢试验：
原理：某些细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸），生成硫化氢，硫
化氢与培养基中的铁盐（硫酸亚铁）或铅盐（醋酸铅）结合生成黑色硫化物（硫化亚铁或硫化铅）。
培养基：克氏双糖铁培养基或醋酸铅培养基 结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性。
应用：常用于肠道杆菌的鉴别。沙门菌属（甲型副伤寒沙门菌为阴性）、爱德华菌属、
亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属和变形杆菌属等多为阳性，其他菌书呈阴性。
尿素酶试验：
原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。 培养基：尿素培养基（pH6.5-6.8） 试剂：酚红指示剂
方法：将被检菌接种于相应的尿素培养基，于35℃培养18 ~24h后观察结果。阴性时应
继续观察4天。
结果：培养基变红者为阳性；培养基不变色者为阴性。
应用：肠杆菌科中的变形杆菌属、摩根菌属和普罗威登菌属的鉴定。奇异变形杆菌和普
通变形杆菌、雷极普罗威登菌和摩根菌为阳性；克雷伯菌为弱阳性；大肠埃希菌、斯氏和产碱普罗威登菌为阴性。
枸橼酸盐利用试验：
原理：某些细菌能利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐作为
唯一氮源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨，使培
宜春学院医学院 杨婧编写
10
第 11 页 共 80 页
养基变碱，使指示剂呈碱性反应。 培养基：枸盐酸盐琼脂斜面培养基
试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色，pH7.6以上呈蓝色）
方法：在枸盐酸盐琼脂斜面上浓密划线，大量接种被检菌，于35 ℃培养1~ 4天，逐日
观察结果。
结果：枸盐酸盐琼脂斜面上有细菌生长，培养基变成深蓝色为阳性；无细菌生长，培养
基颜色不变（淡绿色）为阴性。
应用：有助于肠杆菌科属间的鉴别。埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属和耶尔森菌属均
为阴性；产气肠杆菌、沙门菌属、克雷伯菌属、黏质和液化沙雷菌、某些变形杆菌以及枸橼酸杆菌为阳性。
13、填空题
⑴ 在形态和染色性上具有特征的致病菌常用＿＿＿方法作初步诊断。如 和 菌。 ⑵ 鉴定细菌常用 凝集试验。此方法是用已知 检测未知 。 ⑴ 直接涂片镜检 结核分枝杆菌 白喉棒状杆菌 ⑵ 直接玻片 抗体 抗原
14、综合分析题
实验室在对细菌培养时，需先制备培养基，根据所培养的细菌不同，选择不同类型的培养基，如培养营养要求高的细菌时，需制备含血清培养基（即在培养基中加入血清）。细菌的保存常用细菌保存液，有时也用牛奶保存，如幽门螺杆菌。 思考题：
⑴ 制备培养基过程中应注意什么？
⑵ 制备含血清培养基时，基础培养基和血清如何进行消毒灭菌？用于保存菌种的牛奶又如何进行消毒灭菌？
? 提示1：培养基制备过程中应注意无菌操作，以防止微生物的污染。
? 提示2：基础培养基通常使用高压蒸汽灭菌法灭菌，以杀灭包括细菌繁殖体和芽胞
在内的所有微生物。含血清培养基和用于保存细菌的牛奶，既要对其进行灭菌处理，又不能破坏营养成分，故常用间歇蒸汽灭菌法。
? 提示3：在制备培养基过程中，应注意无菌操作，通常可在经紫外线照射后的无菌
罩或实验室中进行培养基的分装。
? 提示4：在准备含血清培养液时，通常使用过滤除菌法除菌，以确保血清中的营养
成分不被破坏。
细菌与环境
1、名词解释：正常菌群；条件致病菌；菌群失调症；重叠感染；消毒；灭菌；无菌；无菌操作；噬菌体；前噬菌体；毒性噬菌体；溶原性细菌；滤过除菌法 ⑴ 正常菌群：定居于正常人体体表及其开放性腔道中的微生物群。在正常情况下对机体有益无害。由于在正常微生物群中以细菌为主，而且对细菌研究得较多而深入，所以将正常微生物群通称为正常菌群。
⑵ 条件致病菌：正常情况下不致病，在特定条件下可致病的正常菌群，称条件致病菌（或：机会致病菌）。
⑶ 菌群失调症：宿主某部位正常菌群中各菌种间的比例发生较大幅度改变并超出正常范围
宜春学院医学院 杨婧编写
11
第 12 页 共 80 页
的状态称为菌群失调。由此而引起的病症称为菌群失调症。
⑷ 重叠感染：或称为二重感染，是一种后果较为严重的菌群失调症，即在抗菌药物治疗原感染性疾病或预防某些微生物感染的过程中，发生的一种新感染。
⑸ 消毒：杀死物体上或环境中的病原微生物的方法。但不一定能杀死含芽孢的细菌或非病原微生物。
⑹ 灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。 ⑺ 无菌：不存在活的微生物的意思。
⑻ 无菌操作：防止微生物进入人体或其他物品的操作技术。
⑼ 噬菌体：是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒。 ⑽ 前噬菌体：整合在细菌染色体上的噬菌体基因。
⑾ 毒性噬菌体：能在宿主细胞内复制增殖，产生许多子代噬菌体，并最终裂解细菌的噬菌体，称毒性噬菌体。 ⑿ 溶原性细菌：染色体上带有前噬菌体的细菌。
⒀ 滤过除菌法：用物理阻留的方法除去液体或空气中的细菌，达到无菌的目的。适用于不耐高温灭菌的物品如血清、毒素、抗生素及空气等的除菌。生物安全柜也是根据这个原理，利用高效空气过滤器的过滤作用，除去空气中的微生物，以达到保护操作对象、保护操作者、保护环境的目的。但滤过除菌法只能除去细菌，一般不能除去病毒、支原体、衣原体和细菌的 L 型。
2、正常菌群的生理作用有哪些？正常菌群转化为机会致病菌的条件有哪些？（简要说明微生态失调的主要原因有哪些？） 正常菌群的生理作用：
⑴ 生物拮抗；⑵ 营养作用；⑶ 免疫作用；⑷ 抗衰老作用；⑸ 抑肿瘤作用。 正常菌群转化为机会致病菌的条件有：
⑴ 抗生素的使用导致菌群失调；⑵ 正常菌群寄居部位改变；⑶ 宿主免疫功能低下如免疫抑制剂使用、激素、射线照射、细胞毒物的使用导致宿主免疫功能低下。
3、常用湿热灭菌方法的种类及其效果与适用范围。
⑴ 巴氏消毒法：用较低温度杀灭液体中的病原菌或特定微生物（如结核杆菌）、保持物品中所需不耐热成分不被破坏的消毒方法。 持续法: 61.1-62.8℃ 30分钟； 瞬间法: 71.7℃ 15-30秒； 常用于消毒牛奶、酒类。
⑵ 煮沸法：常用于消毒食具、刀剪、注射器等
繁殖体 ：煮沸100℃，5min； 芽孢：煮沸100℃，1～3h。
⑶ 流动蒸气消毒法：阿诺蒸锅或蒸笼。
繁殖体 ：煮沸100℃，15～30min
⑷ 间歇蒸气灭菌法：如血清培养基的灭菌。
⑸ 高压蒸气灭菌法：一种最有效、最彻底的灭菌方法。在103.4 kPa（1.05kg/cm2）蒸气压下，温度121.3℃，维持15-20min，可杀灭包括芽胞在内的所有微生物。是普通培养基、生理盐水、手术敷料等耐高温、耐湿物品的最佳灭菌法。
4、高压蒸汽灭菌法所要求的条件和用途各是什么？
宜春学院医学院 杨婧编写
12