量。

(2)为保证第二个目的基因片段反向连接，处理已开环质粒所用的两种限制酶是__________和__________。

(3)科学家发现，培育成功的转基因番茄植株对光能的利用能力有所下降，据图一推测可能的原因是____

__________________。为解决此问题，可以按照乳腺生物反应器的原理，在此表达如“发卡”的DNA片段前面加入只在果实中发挥作用的___________________。

(4)去磷酸化是去掉黏性末端最外侧游离的磷酸基团。对已开环的质粒二两端去磷酸化的主要作用是阻止其__________________________，该DNA分子仍可以和目的基因连接，形成缺少_________个磷酸二酯键的重组质粒，随后在细胞中被修复。

33.（8分）（1）番茄红素环化酶 翻译 （2）Ecl BamHⅠ （3）胡萝卜素、叶黄素合成受阻，光反应减弱 启动子 （4）自身成环（自身环化） 2 【考查方向】本题考查基因工程，考查考生对基因工程步骤的应用能力

【解析】（1）在质粒中插入的目的基因是番茄红素环化酶基因，其转录形成发卡结构，导致细胞内番茄红素环化酶的mRNA被降解，阻止细胞内的表达过程；（2）质粒Ⅱ中的目的基因两端有EcoRⅠ和BamHⅠ的酶切位点，为保证第二个目的基因的插入部位，应选用Ecl和BamHⅠ对目的基因和质粒Ⅱ进行切割；（3）转基因植物中，番茄红素环化酶的数量减少，导致胡萝卜素和叶黄素的合成受阻，光合作用速率减慢；可选择特殊的启动子插入到目的基因之前，使目的基因只在果实细胞中表达；（4）去掉质粒两端的磷酸集团，可以有效防止其自身环化，进行目的基因连接后，由于不能形成环状结构，比正常重组质粒少两个磷酸二酯键。

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