二、蛋白质分离、纯化方法

蛋白质分离纯化的方法，是以目的蛋白质与杂蛋白或其他杂 质成分在溶液中下列性质的差异为原理的：

1、分子大小 2、溶解度 3、带电荷性质 4、吸附性质

5、对配体分子的生物学亲和力

1、根据分子大小不同的纯化方法

1）透析和超（过）滤 2）密度梯度（区带）离心 3）凝胶过滤

1）透析和超（过）滤

透析（ dialysis）：利用蛋白质分子不能通 过半透膜的性质，使蛋白质和其它小分子 物质如无机盐、单糖等分开。

常用的半透膜是玻璃纸（赛璐玢纸）、 火棉纸（赛璐琔纸）以及其它改进型的纤 维素材料。

透析袋 透析液 搅拌子 磁力搅拌器

透析装置示意图

超过滤（ultrafiltration）：利用压力或者离 心力，强行使水和其它小分子溶质通过半 透膜，而蛋白质被截留在膜上，以达到浓 缩和脱盐的目的。

滤膜

离 心

2）密度梯度（区带）离心

蛋白质颗粒的沉降，不仅决定于 其大小，而且取决于其密度。 蛋白质颗粒在具有密度梯度的介 质中离心时，质量和密度大的颗粒比 小的颗粒沉降得快，并且每种蛋白质 颗粒沉降到与自身的密度相等的介质 密度梯度时，即停止不动，最后，各 种蛋白质在离心管中被分离成各自独 立的区带。

分成区带的蛋白质可以在管底刺 一个小孔逐滴放出，分部收集。

滴加样品

4% 8%

离 心 管

12% 16% 20%

蔗 糖 浓 度

蔗糖密度梯度