3）凝胶过滤

凝胶过滤，又称凝胶过滤层析，也称分子排阻层析或凝胶 渗透层析，是根据分子大小分离蛋白质混合物的最有效方法之 一。

A、凝胶过滤的介质 B、凝胶过滤的原理

A、凝胶过滤的介质

凝胶过滤所用的介质是凝胶珠或称凝胶颗粒，其内部是多孔的网 状结构。

凝胶的交联度或孔度（网孔大小）决定了凝胶的分级分离范围， 即能够被该凝胶分离开的蛋白质混合物的相对分子量范围，例如：

Sephadex G-50的分级分离范围是 1500 ~ 30000

排阻极限有时候也被用来表示分级分离范围的上限，其定义为 “不能扩散进入凝胶珠微孔的最小分子的相对分子量”，例如：

Sephadex G-50的排阻极限为 30000

目前经常使用的凝胶有交联葡聚糖（ Sephadex）、聚丙烯酰胺凝 胶(Bio-gel P)和琼脂糖(Sepharose或Bio-Gel A)等。

B、凝胶过滤的原理

蛋白质混合物

小溶质分子

大溶质分子

水化的 凝胶颗粒

多孔板

当不同大小的蛋白质流经凝胶层析柱时，比凝胶孔径大的分子， 不能进入珠内的网状结构，而被阻挡在凝胶珠之外，随着溶剂在凝胶 珠之间的间隙向下移动，首先流出凝胶柱。比网孔小的分子，不同程 度地进入凝胶珠中，以不同的速度流出层析柱。

2、利用溶解度差异的纯化方法

利用蛋白质溶解度的差别来分离纯化蛋白质是实践中最 常用的方法。

1） 等电点沉淀和 pH控制 2） 蛋白质的盐溶和盐析 3） 有机溶剂分级分离

4） 温度对蛋白质溶解度的影响