检验科PCR室作业指导书

ABCD人民医院检验科 PCR室作业指导书 主题内容

临床标本的保存操作程序 文件编号:ABCD-3-PR-10 版本/修订号:A/0 生效日期:20060808 第 21 页 共90 页 临床标本的保存操作程序

1.目的:临床标本正确保存,以便必要时复查。 2.适用范围:分子诊断室的所有临床检测标本。 3.负责人: 操作人: 4.程序:

4.1 处理前的标本保存

a)HBV:全血标本可4℃下短期(24h内)保存,长期保存则需分离出血清(血浆),保存于-20℃下。 d)HCV:在1小时内分离血清,吸取200μl,加入20u Rnasin,保存于-20℃。尽可能快的提取RNA。

c)TB:痰或胸腹水、脑脊液、脓液标本用于TB检测的短期保存可置于4℃下,长期保存则于-20℃下。 d)CT:标本短期(24h内)保存置于4℃下,长期保存则需在-20℃下。 4.2 报告发出后的标本保存:

a) 提取的核酸标本当天检测可置4℃保存,如当天不检测应置-20℃保存。报告发出后第二天丢弃。 b) 原始血清/血浆样本在报告发出后放入低温冰箱-20℃保存1个星期,以备复查。超过1个星期保存期的标本由室负责人酌情处理,一般按生物传染性物品交医院统一处理。

c)血清/血浆标本放置低温冰箱保存时须有记录,按编号顺序存放,并由专人负责管理。 4.3 特殊标本的处理:

对暂不检测的项目和规定时间外收到的零散样本,要随时登记和交班,以免漏检,遗失和延误检验。对特殊样本或特殊病人的样本,实行“首接”负责制,所谓特殊样本是指难于采集的样本,以及特殊病人的样本一律实行“首接”负责制,无论那位工作人员,一旦收到样本后,均须负其责任,不得以任何借口推托,及时和正确保管和转送样本到有关实验室或有关人员,同时作交班记录和双签名。对于做长期病情动态考察的病人标本一律置于-20℃下长期保存,使用时再按需取出检测。 5. 本文涉及以下图表:

PCR扩增接收标本记录表 拒收标本记录本 标本超低温保存记录表

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临床标本采集运送接收程序 文件编号:ABCD-3-PR-11 版本/修订号:A/0 生效日期:20060808 第 22 页 共90 页 临床标本的采集、运送、接收程序

1.目的:规范临床待检标本的正确采集、送检和处理。 2.适用范围:分子诊断室的所有临床检测标本。 3.负责人: 操作人: 4.程序: 4.1 标本的采集

4.1.1 标本由临床各科室接受过临床基因扩增检测有关标本采集、保存、运输知识培训的医护人员采集并

送至实验室。 4.1.2标本采集要求

a)血液标本:用2ml真空采集管或1.5ml高压灭菌离心管采集血液标本,血标本采集后在2小时内送达实验室(HCV采用EDTA抗凝的血浆)。离心(检验单与标本一道)后用一次性吸管吸取血清或血浆加入经消毒的1.5ml的离心管中,编号。

b)痰标本:用带盖的无菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰标本送检。(对于无痰或少痰的患者,可用45℃加温的100g/L NaCl水溶液雾化吸入或改变体位以使痰液易于咳出;对于小儿可以轻压胸骨柄上方以诱导咳痰,用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射,用棉拭子采集标本。)标本在室温下保存不能超过24小时。

c)生殖道拭子:尿道或阴道分泌物由医生用专用取样拭子(灭菌,一次性)采集样本,及时送检。采集生殖道拭子标本,要求男性病人在采样前2小时内不能排尿,采样时,将棉拭子伸入男性尿道及女性宫颈口2~3cm,转动一周以获得上皮细胞。 d)尿液:由病人自留尿液于无菌封闭的杯中送检。

e)脑脊液和胸腹水:由临床医生采集后放入消毒的试管中及时送检。

注意:所有上述用于临床标本采集的容器如试管或离心管,均应使用前高压灭菌和密封。

4.2 标本的运送

标本采集后,密闭、标(贴)姓名,应尽可能快的送至检测实验室,如运送时间需2小时以上,必须用冰盒送至实验室。

标本中如加入了适当的稳定剂,如用于RNA测定加入4mol/L异硫氰酸胍盐(GITC)的血清(浆)标本和用于DNA测定的EDTA抗凝血等,则可在室温下运送或邮寄。 4.5 接收

4.5.1严格对各类样本的查对和双签制度,对病房各样本及时进行验收,查对,不符合要求的样本一律退回,并有书面记录。

ABCD人民医院检验科 PCR室作业指导书 主题内容 4.5.2 分类验证 4.5.2.1 一般内容

临床标本采集运送接收程序 文件编号:ABCD-3-PR-11 版本/修订号:A/0 生效日期:20060808 第 23 页 共90 页 进入实验室的样本在进行编号、离心前,工作人员应再次认真查对姓名,联号,住院号,病区床号,项目等。对不符合要求者应作记录,并及时通知采样科室,正确及时地补采样,以免延误病人的检测结果报告。对书写不清楚的申请单,当事者要及时与病房联系(可电话),明确受检者姓名,住院号,性别,年龄,病区,床号和检验项目等;并作相应记录。

4.5.2.2 按检测项目验证标本

a)HBV:所需标本类型为未溶血的血清或血浆,注意血浆标本所用的抗凝剂,用EDTA-K2,不可使用肝素。标本为全血时应及时分离出血浆保存。

b)HCV:同上,但标本为血清时,要在1小时内分离出血清用于检测。 c)TB:晨起第一口深部痰(不能为唾液)、胸腹水、脑脊液、脓液或穿刺液。 d)CT:尿道或阴道分泌物。

4.5.2.3 实验室人员对标本进行查验,出现下表中不合要求的情况时,应拒收标本,登记并告知相关科室。

类别 1 2 3 4 5 6 7 8 9 4.5.2.4 拒收程序 a)对拒收的不合格标本应在拒收标本记录本上登记。 b)填写不合格标本处置单,并随同申请单送返送检科室。 c)必要时电话告之相关科室医生或护士。 5. 本文涉及以下图表:

PCR扩增接收标本记录表 PCR扩增拒收标本记录表

拒收原因 未正确使用抗凝剂的标本造成凝血的标本 严重溶血 严重脂血 采血量不足(血清<200uL、全血<1mL) 检测项目TB的标本是唾液而不是晨痰 标本容器破裂,标本被污染 标本的病人姓名、年龄、性别等与检验单不相符 RNA检测,采样时间超过 2小时 其他可能严重影响检验结果的原因

ABCD人民医院检验科 PCR室作业指导书 主题内容 PCR生物安全防护措施 文件编号:ABCD-3-PR-12 版本/修订号:A/0 生效日期:20060808 第 24 页 共90 页 PCR生物安全防护措施

1.目的:预防工作人员在实验过程中被感染或污染。 2.适用范围:适用于本室所有工作人员。 3.负责人: 操作人: 4.细则:

4.1 实验人员在实施生物防护措施时,应严格遵守各项相应的规章制度,建立起强烈的生物防护意识。 4.2 每天更换废液缸的2%戊二醛溶液,并保证2%戊二醛溶液用量为废液缸内总液量的五分之一左右。配置消毒液时,正确量取足量的消毒剂(用量杯,保证浓度),水的用量也要正确,缸体密封性良好。 4.3 实验台面日常清洁时使用75%的酒精擦拭。

4.4 每区每次实验后紫外灯照射30~60分钟,如有需要可延长照射时间。

4.5 所有来自病人的血液或体液标本均应视作传染源,因此在标本的采集、运输过程中,标本容器应

完好无泄漏。

4.6 处理标本时应穿工作服、戴手套,以免沾上皮肤。如手或其它部位的皮肤沾上血液或体液标本以

及试剂,应立即冲洗干净。有下列情况之一者,需另外消毒:手接触有传染性的微生物,水龙头、水池肥皂可能被污染,工作服可能被大量细菌污染。消毒剂可用“84”消毒液。 4.7 在实验过程中,病人标本(血液、体液)或试剂不慎溅入眼内应立即用清水洗。

4.8 实验过程中在使用针具等锐器时,尽量小心防止受伤。若被锐器刺破时,应立即脱下手套,尽量

挤压伤处,使血流出,然后用碘酒、酒精消毒,必要时进行预防补救措施。

4.9 在实验过程中病人标本(血液、体液)外漏时,应立即用2%戊二醛滴上,滤纸或纱布盖上半小时,

然后用酒精擦洗,并用紫外灯消毒。

4.10 实验完毕离开时,应脱下所有该实验区个人防护装备。 4.11 实验完毕后应对实验室进行紫外消毒。

4.12 遇有意外事故应立即报告科室负责人,当事人应立即注射相关疫苗或进行预防性治疗,并进行医学观察,严重者应报告院技术负责人。 5. 本文涉及以下表格

紫外消毒车消毒记录表 实验室清洁消毒记录表

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