ABCD人民医院检验科 PCR室作业指导书 主题内容
临床标本的保存操作程序 文件编号：ABCD-3-PR-10 版本/修订号：A/0 生效日期：20060808 第 21 页 共90 页 临床标本的保存操作程序
1．目的：临床标本正确保存，以便必要时复查。 2．适用范围：分子诊断室的所有临床检测标本。 3．负责人： 操作人： 4．程序：
4．1 处理前的标本保存
a）HBV：全血标本可4℃下短期（24h内）保存，长期保存则需分离出血清（血浆），保存于-20℃下。 d）HCV：在1小时内分离血清，吸取200μl，加入20u Rnasin，保存于-20℃。尽可能快的提取RNA。
c）TB：痰或胸腹水、脑脊液、脓液标本用于TB检测的短期保存可置于4℃下，长期保存则于-20℃下。 d）CT：标本短期（24h内）保存置于4℃下，长期保存则需在-20℃下。 4．2 报告发出后的标本保存：
a） 提取的核酸标本当天检测可置4℃保存，如当天不检测应置-20℃保存。报告发出后第二天丢弃。 b） 原始血清/血浆样本在报告发出后放入低温冰箱-20℃保存1个星期，以备复查。超过1个星期保存期的标本由室负责人酌情处理，一般按生物传染性物品交医院统一处理。
c）血清/血浆标本放置低温冰箱保存时须有记录，按编号顺序存放，并由专人负责管理。 4．3 特殊标本的处理：
对暂不检测的项目和规定时间外收到的零散样本，要随时登记和交班，以免漏检，遗失和延误检验。对特殊样本或特殊病人的样本，实行“首接”负责制，所谓特殊样本是指难于采集的样本，以及特殊病人的样本一律实行“首接”负责制，无论那位工作人员，一旦收到样本后，均须负其责任，不得以任何借口推托，及时和正确保管和转送样本到有关实验室或有关人员，同时作交班记录和双签名。对于做长期病情动态考察的病人标本一律置于-20℃下长期保存，使用时再按需取出检测。 5. 本文涉及以下图表：
PCR扩增接收标本记录表 拒收标本记录本 标本超低温保存记录表
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临床标本采集运送接收程序 文件编号：ABCD-3-PR-11 版本/修订号：A/0 生效日期：20060808 第 22 页 共90 页 临床标本的采集、运送、接收程序
1．目的：规范临床待检标本的正确采集、送检和处理。 2．适用范围：分子诊断室的所有临床检测标本。 3．负责人： 操作人： 4．程序： 4．1 标本的采集
4．1．1 标本由临床各科室接受过临床基因扩增检测有关标本采集、保存、运输知识培训的医护人员采集并
送至实验室。 4．1．2标本采集要求
a）血液标本：用2ml真空采集管或1.5ml高压灭菌离心管采集血液标本，血标本采集后在2小时内送达实验室（HCV采用EDTA抗凝的血浆）。离心（检验单与标本一道）后用一次性吸管吸取血清或血浆加入经消毒的1.5ml的离心管中，编号。
b）痰标本：用带盖的无菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰标本送检。（对于无痰或少痰的患者，可用45℃加温的100g/L NaCl水溶液雾化吸入或改变体位以使痰液易于咳出；对于小儿可以轻压胸骨柄上方以诱导咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集标本。）标本在室温下保存不能超过24小时。
c）生殖道拭子：尿道或阴道分泌物由医生用专用取样拭子（灭菌，一次性）采集样本，及时送检。采集生殖道拭子标本，要求男性病人在采样前2小时内不能排尿，采样时，将棉拭子伸入男性尿道及女性宫颈口2～3cm，转动一周以获得上皮细胞。 d）尿液：由病人自留尿液于无菌封闭的杯中送检。
e）脑脊液和胸腹水：由临床医生采集后放入消毒的试管中及时送检。
注意：所有上述用于临床标本采集的容器如试管或离心管，均应使用前高压灭菌和密封。
4．2 标本的运送
标本采集后，密闭、标（贴）姓名，应尽可能快的送至检测实验室，如运送时间需2小时以上，必须用冰盒送至实验室。
标本中如加入了适当的稳定剂，如用于RNA测定加入4mol/L异硫氰酸胍盐（GITC）的血清（浆）标本和用于DNA测定的EDTA抗凝血等，则可在室温下运送或邮寄。 4．5 接收
4．5．1严格对各类样本的查对和双签制度，对病房各样本及时进行验收，查对，不符合要求的样本一律退回，并有书面记录。
ABCD人民医院检验科 PCR室作业指导书 主题内容 4．5．2 分类验证 4．5．2．1 一般内容
临床标本采集运送接收程序 文件编号：ABCD-3-PR-11 版本/修订号：A/0 生效日期：20060808 第 23 页 共90 页 进入实验室的样本在进行编号、离心前，工作人员应再次认真查对姓名，联号，住院号，病区床号，项目等。对不符合要求者应作记录，并及时通知采样科室，正确及时地补采样，以免延误病人的检测结果报告。对书写不清楚的申请单，当事者要及时与病房联系(可电话)，明确受检者姓名，住院号，性别，年龄，病区，床号和检验项目等；并作相应记录。
4．5．2．2 按检测项目验证标本
a）HBV：所需标本类型为未溶血的血清或血浆，注意血浆标本所用的抗凝剂，用EDTA-K2，不可使用肝素。标本为全血时应及时分离出血浆保存。
b）HCV：同上，但标本为血清时，要在1小时内分离出血清用于检测。 c）TB：晨起第一口深部痰(不能为唾液)、胸腹水、脑脊液、脓液或穿刺液。 d）CT：尿道或阴道分泌物。
4．5．2．3 实验室人员对标本进行查验，出现下表中不合要求的情况时，应拒收标本，登记并告知相关科室。
类别 1 2 3 4 5 6 7 8 9 4．5．2．4 拒收程序 a）对拒收的不合格标本应在拒收标本记录本上登记。 b）填写不合格标本处置单，并随同申请单送返送检科室。 c）必要时电话告之相关科室医生或护士。 5. 本文涉及以下图表：
PCR扩增接收标本记录表 PCR扩增拒收标本记录表
拒收原因 未正确使用抗凝剂的标本造成凝血的标本 严重溶血 严重脂血 采血量不足（血清＜200uL、全血＜1mL） 检测项目TB的标本是唾液而不是晨痰 标本容器破裂，标本被污染 标本的病人姓名、年龄、性别等与检验单不相符 RNA检测，采样时间超过 2小时 其他可能严重影响检验结果的原因
ABCD人民医院检验科 PCR室作业指导书 主题内容 PCR生物安全防护措施 文件编号：ABCD-3-PR-12 版本/修订号：A/0 生效日期：20060808 第 24 页 共90 页 PCR生物安全防护措施
1．目的：预防工作人员在实验过程中被感染或污染。 2．适用范围：适用于本室所有工作人员。 3．负责人： 操作人： 4．细则：
4．1 实验人员在实施生物防护措施时，应严格遵守各项相应的规章制度，建立起强烈的生物防护意识。 4．2 每天更换废液缸的2%戊二醛溶液，并保证2%戊二醛溶液用量为废液缸内总液量的五分之一左右。配置消毒液时，正确量取足量的消毒剂（用量杯，保证浓度），水的用量也要正确，缸体密封性良好。 4．3 实验台面日常清洁时使用75%的酒精擦拭。
4．4 每区每次实验后紫外灯照射30～60分钟，如有需要可延长照射时间。
4．5 所有来自病人的血液或体液标本均应视作传染源，因此在标本的采集、运输过程中，标本容器应
完好无泄漏。
4．6 处理标本时应穿工作服、戴手套，以免沾上皮肤。如手或其它部位的皮肤沾上血液或体液标本以
及试剂，应立即冲洗干净。有下列情况之一者，需另外消毒：手接触有传染性的微生物，水龙头、水池肥皂可能被污染，工作服可能被大量细菌污染。消毒剂可用“84”消毒液。 4．7 在实验过程中，病人标本（血液、体液）或试剂不慎溅入眼内应立即用清水洗。
4．8 实验过程中在使用针具等锐器时，尽量小心防止受伤。若被锐器刺破时，应立即脱下手套，尽量
挤压伤处，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要时进行预防补救措施。
4．9 在实验过程中病人标本（血液、体液）外漏时，应立即用2%戊二醛滴上，滤纸或纱布盖上半小时，
然后用酒精擦洗，并用紫外灯消毒。
4．10 实验完毕离开时，应脱下所有该实验区个人防护装备。 4．11 实验完毕后应对实验室进行紫外消毒。
4．12 遇有意外事故应立即报告科室负责人，当事人应立即注射相关疫苗或进行预防性治疗，并进行医学观察，严重者应报告院技术负责人。 5. 本文涉及以下表格
紫外消毒车消毒记录表 实验室清洁消毒记录表