偿间歇出现（图9.2-2P）？
(5)短时间内改变刺激强度在心室舒张早期之后的同一时段，刺激心室，观察心室收缩的幅度是否发生变化？
(6) 用连续的刺激刺激心室肌，观察心脏是否会出现强直收缩？
【注意事项】
1．经常给心脏滴加任氏液，以保持心脏适宜的环境。 2．张力传感器与蛙心夹之间的细线应保持适宜的紧张度。
3．双极刺激电极与心室接触良好的同时，还应尽量不让其阻碍心脏的自发收缩。 4．实验项目(5)要严格掌握刺激时间和时段。
5．夹蛙心夹时，不宜夹的面积太大，以免影响或损伤心室，而夹的面积太小，又容易滑脱。
【实验结果】
1．剪贴记录曲线，做好标记，并分析讨论。
2．如果以刺激强度为横坐标，心脏收缩幅度为纵坐标，作心脏收缩强度曲线，该曲线应有何特点？为什么？
【思考题】
1．何谓期前收缩和代偿间隙？心肌有较长的不应期有何生理意义？ 2．代偿间隙是如何产生的，期前收缩之后一定有代偿间隙吗？
实验9.3 牛蛙离体心脏灌流
【材料及设备】 牛蛙；蛙手术器械；蛙心夹；蛙心套管；生物信号采集系统；蛙板；
滴管；试管夹；黑白细丝线；任氏液；0.65％NaCl；１％KCI；２％CaCl2； 3％乳酸；0.01％肾上腺素；0.01％乙酰胆碱
【方法和步骤】
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１. 离体蛙心制备
破坏蛙的脑和脊髓，按实验10.1中的方法暴露心脏。用蛙心夹夹住心室。在左主动脉下方穿一线，距动脉圆锥2—3mm处结扎（结扎1）。再将心室翻起，于静脉窦之外前、后腔静脉处穿线结扎（结扎2），阻断静脉血回流，结扎时切勿损伤静脉窦。然后将心脏放回原位，在左右动脉下穿一线，打活结。左手提起左主动脉的结扎线，右手用眼科剪在动脉圆锥前端的左主动脉上剪一斜口，开口朝向心室。左手用眼科镊夹住切口缘，轻轻上提，使切口扩大，右手持盛有任氏液的斯氏蛙心套管，从此开口处插入到动脉圆锥。当尖端插到动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退一点，使尖端向动脉圆锥背部后方的心室方向推进，在心室收缩时插入心室（如图9.3-1）。判断套管是否插入心室，可依据插入后灌流液是否有心室收缩射出的血液，或灌流液的液面是否随心脏的收缩而上下起
图9.3-1 蛙心插管插入心室示意
伏。此过程切不可用力，插入不可过深以防插入心肌而损伤心脏。插入心室后，首先将备用的活结在插管处扎紧（结扎3），然后将结扎线固定在套管的小玻璃钩上，以防心脏滑脱。最后剪断结扎线（结扎1、3）以外的血管，轻轻提起心脏，在静脉窦结扎线（结扎2）下慢慢剪去所连血管、组织，游离出心脏。用任氏液反复冲洗心室内余血，直至全部灌洗液变清为止，保持一定的液面高度（约1.5cm—2cm）即可进行实验。
2.连接实验装置
将带有蛙心的套管固定在支架上，用蛙心夹连接心尖和张力传感器，张力传感器的输入插头插入桥式放大器，其输出插头插入 Powerlab 的 pod 输入通道（图9.3-2)。
打开计算机，进入“ LabTutor实验”，选择 “蛙心”，下拉实验菜单，点击“实验1 对照数据”。按系统程序提示操作实验。
3. 实验项目
图9.3-2 蛙心灌流装置连接
桥式放大器 万向滑轮 张力换能器
Powerlab
(1) 描记一段蛙心正常收缩曲线。
(2) 钠离子作用：向套管中加入 0.65 % NaCl数滴，并与管中任氏液混匀，观察蛙心
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活动有何变化？待变化明显时迅速吸出管内溶液，并以任氏液反复冲洗数次。当蛙心活动恢复正常后，再进行下一项实验（以下各项皆同此）。
(3) 钾离子作用：向套管中加入％ KCI 1～2滴，观察蛙心活动有何变化？ (4）钙离子作用：向套管中加入2％ CaCI2 1～2滴，观察蛙心活动有何变化？ (7) 肾上腺素作用：向套管中加入0.01％ 肾上腺素 1～2滴，观察蛙心活动有何变化？ (8）乙酰胆碱作用：向套管中加入0.01％ 乙酰胆碱 1～2滴，观察蛙心活动有何变化？(9) 酸的作用：向套管中加入 3％的乳酸1～2滴，观察蛙心活动有何变化？ (9) 冷的作用：向套管中换入4℃ 冷任氏液，观察蛙心活动有何变化？ (10）热的作用：向套管中换入37℃ 温热任氏液，观察蛙心活动有何变化？
【注意事项】
1．制备离体心脏标本时，勿伤及静脉窦。
2．蛙心夹应在心室舒张期一次性夹住心尖，避免因夹伤心脏而导致漏液。
3．每一观察项目都应先描记一段正常曲线，然后再加药并记录其效应。加药时应在心跳曲线予以标记，以便观察分析。
4．各种滴管应分开，不可混用。
5．在实验过程中，插管内灌流液面高度应保持恒定；仪器的各种参数一经调好，应不再变动。
6．给药后若效果不明显，可再适量滴加，并密切注意药物剂量添加后的实验结果。给药量必须适度，加药出现变化后，就应立即更换任氏液，否则会造成不可挽回的后果，尤其是K, H 稍有过量，即可导致难以恢复的心脏停跳。
7．标本制备好后，若心脏功能状态不好（不搏动），可向插管内滴加1-2滴2％ CaC12
或0.01％肾上腺素，以促进（起动）心脏搏动。在实验程序安排上也可考虑促进和抑制心脏搏动的药物交换使用。
8．谨防灌流液沿丝线流入张力传感器内而损坏其电子元件。
【问题与解释】
1．插管插入后，管中的液面不能随心脏搏动而波动，或波动幅度不大。 (1) 插管插到了主动脉的螺旋瓣中，未进入心室。 (2）插管插到了主动脉壁肌肉和结缔组织的夹层中。
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(3) 插管尖端抵触到心室壁。 (4) 插管尖端被血凝块堵塞。 2．插管后，心脏不跳动。 (1）心室或静脉窦受损。 (2) 插管尖端深入心室太多。 (3）心脏机能状态不好。
【实验结果】
剪贴各项观察记录曲线，并对各项实验结果进行列表比较、分析。
【思考题】
1. 正常蛙心搏动曲线的各个组成部分分别反映了什么？ 2. 分析每一实验步骤所引发的实验现象的原因？ 3．根据心肌生理特性分析各项实验结果。
4. 高钙任氏液和肾上腺素引起蛙心活动变化有何异同点，为什么？ 5. 以上实验结果归纳起来，说明了什么问题？
6．在实验过程中灌流液的液面为何要保持恒定？灌流量对心肌的收缩有什么影响。
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