石蜡包埋技术
制作石蜡切片，切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中，而水与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡，包埋前必须将组织内所含的水分脱去。而大多数的组织固定剂是水溶液，随后的水冲洗也使其含有大量水分，因此必须先行脱水，一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。由于酒精和石蜡不能混合，须再用一种石蜡的溶剂来臵换酒精，因大多数石蜡溶剂有使组织的折光率增高并表现为透明或半透明状，所以此步骤又称透明。最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块。
常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋，前一章中已述过固定。
第一节 脱 水 脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。 一．常用的脱水剂
1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。因此在以酒精作为脱水剂时，应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。
第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异，经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。
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用AAF固定液固定的组织可直接臵于95％酒精开始脱水。用醇性固定剂（如Carnoy）则可臵于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸。
一般情况下，组织经过70％，80％，90％，95％，以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求。但是为了能使大量的组织块同时进行脱水，则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。脱水时间应视组织种类，组织块大小，厚薄和固定剂的不同而异。如脱钙的骨组织，实质性脏器等的脱水过程宜短，而疏松结缔组织，脂肪组织等，脱水过程则宜适当延长。水分必须脱干净，脂肪必须溶去。含有铬酸的固定剂固定的组织，脱水时间不宜过长，而镀银组织更应注意，脱水时间应比为镀银的同类组织要短。
脱水的基本原则：从低浓度酒精开始逐渐升到高浓度酒精，以保持组织中的水分完全脱净。一般1cmX1cmX0.2cm大小的组织,脱水全过程仅需要数小时即可达到完全脱水。在各级浓度酒精内处理的最短时间分别减少到2—4小时也能获得满意的结果。如果组织脱水不尽,随后的透明,浸蜡都会受到影响,致使切片很难以完成。较差质量的切片,很容易造成在染色时脱片,这样的组织蜡块，因其含有一定的水分,一经与空气接触即干燥而凹陷。脱水不尽的组织是不能切出很好的切片的。
外检标本的制作,目前都采用快速脱水的方法。科研标本,教学标本的脱水时间比较长,其目的在于更充分脱水,并适当加强了组织的硬度。
酒精脱水剂使用不宜太久,应适时更换新液。当酒精混浊,变黄或酒精滴于水中出现乳白色混浊时,说明酒精中溶解了过量的脂类,这种情况一出现,将会影响脱水,则应及时更换。
各种浓度酒精的配制：
切片室内应常备有70%,80%,85%等各种浓度的酒精。配制时应以95%酒精作为基液加水稀释,不要用无水酒精去配制,因无水酒精的价格较高,极不经济。
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配制方法如下：
a. 先将高浓度酒精注入量杯，其量同将要稀释酒精浓度数字相等。 b. 加入蒸馏水，致总量达到原酒精浓度的数字量。例如：
用95%酒精配制成70%酒精时： (1)取95%酒精70毫升； (2)加蒸馏水使达到95毫升； 稀释后的酒精既为70%的酒精。 用80%酒精配制成60%酒精时： (1)取80%酒精60毫升； (2)加蒸馏水使达到80毫升；
稀释后的酒精既为浓度为60%的酒精.其余类推,其他的试剂的稀释也均可以参照此方法进行配制。
2.丙酮(Acetone)：可用作固定液,也是一种比较好的脱水剂。脱水能力强、速度快,可配制不同浓度进行脱水。但一般情况下,多用在无水酒精的补充脱水。
丙酮脱水时间比酒精强,但容易使组织过度硬化,所以应适当掌握脱水时间。 3.正丁醇(γ-Buty alcohol)：正丁醇脱水能力较酒精弱,可与水、酒精相混合,而且也能溶解石蜡,因此正丁醇不仅可以替代酒精使组织脱水,还可以代替二甲苯使组织透明。平常在稀释时都与酒精按照一定比例配制使用,或将组织脱水至90%酒精后移入正丁醇,
正丁醇再脱水后可直接投入石蜡。用正丁醇脱水,组织比较少引起收缩和硬化等不良结果。
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4.二氧乙环(Dioxan)：二氧乙环是一种有毒物质,易挥发(使用场所必须通风),能同水、酒精、二甲苯相混合并能溶解石蜡,是一种既可以脱水,也具有透明效果的液体。脱水一般可以70%开始,再经过90%至纯二氧乙环,然后浸入石蜡。二氧乙环脱水对组织无收缩和硬化等不良现象,对较硬的组织或易收缩的组织可使用二氧乙环。 二.组织的摇震
为加快脱水进程可将标本放入各级酒精内借助机器或手工震摇，还可以加温促进脱水。即将标本装在塞紧的玻璃瓶臵于包埋箱或温箱内，因液体受热产生的正压可增加溶液的对流。但热酒精会使组织过硬，并有爆裂危险，除急诊外，最好不用此方法。
第二节 透 明 组织脱水后，还要经过一个浸蜡的媒剂透明过程。目的是使石蜡渗透到组织中去，达到包埋的支持作用。常用的脱水剂如酒精等，不能溶解石蜡与之相混合，因此必须使用一种既可以同酒精又能同石蜡相混合的媒剂，当组织脱水后，浸蜡之前将组织投入这种媒剂中。由于两剂能相混合，另一方面也由于这种媒剂比酒精比重大，组织中的酒精就被该媒剂取代，待酒精完全被该媒剂完全取代后，组织即成透明状态，因此我们长称这种媒剂为透明剂，在制片中的这一过程就称为透明过程。
实质上透明仅是一种过程而非目的，其所以出现透明现象使因其折光系数改变的缘故。从组织的状态上看，由于组织经过媒剂的作用之后，其折射系数近于组织蛋白的折射系数，从而显示出透明状态。组织一旦呈现透明状态，也说明脱水剂已被媒剂所取代。透明后就可以将组织浸入溶解的石蜡进行浸蜡。 透明剂
透明剂很多，一般常用的有二甲苯，苯，甲苯，氯仿，香柏油等。
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